д-р мед. наук, проф. каф. молекулярной фармакологии и радиобиологии им. акад. П.В. Сергеева
The aim of the study. The study of the binding pregna-D’-pentaran with progesterone receptors in the mononuclear cell fraction of peripheral blood (MNFK) and cell culture HeLa, assessment of the compounds impact on cells of these cultures and the level of TNF-alpha in MNFK. Material and methods. Blood samples were taken from 32 patients with uterine cancer (average age 36,8 ± 0,78 years), peripheral blood MNFK isolated by Boyum. To assess the binding activity of the test compounds using the method of radioligand analysis. Steroids (50 nM) were incubated with MNFK within 72 hours and the amount of cytokines using ELISA kits ("Vector-Best") for instructions. Pentaranov impact on cell viability was assessed by MTT assay. Statistical processing was performed using Statsoft Statistica software and MS Excel. Results. All studied pregna-D’-pentaran exhibit relatively high affinity for ER and HeLa cells MNFK, especially IV, III, who had practically no effect on the viability MNFK and effectively inhibited the growth of HeLa cells. These compounds also stimulate the production of immune cells cytokine TNF-alpha. Conclusions. From 6 representatives of pregna-D’-pentaran we found two of the most promising compounds - (HI-873) and 16a, 17a-cyclohexanol-5aH-pregnan-3 ,20-dione (IV-to-100). These compounds with maximum inhibition of HeLa cell viability do not have a cytostatic effect on the immune cells and stimulate the production of the latest cytotoxic cytokine TNF-alpha.
Цель исследования. Изучение связывания прегна-D'-пентаранов с рецепторами прогестерона в мононуклеарной фракции клеток периферической крови (МНФК) и культуре клеток HeLa, оценка влияния соединений на выживаемость клеток этих культур и уровень продукции ФНО-альфа в МНФК. Материал и методы. Кровь забирали у 32 пациенток с миомой матки (средний возраст 36,8 ± 0,78 года), МНФК периферической крови выделяли методом Boyum. Для оценки связывающей активности испытуемых соединений применялся метод радиолигандного анализа. Стероиды (50 нМ) инкубировали с МНФК в течение 72 ч и в супернатанте определяли количество цитокинов с помощью ИФА-наборов ("Вектор-Бест") по инструкции. Влияние пентаранов на жизнеспособность клеток оценивалось с помощью МТТ-теста. Статистическую обработку проводили с использованием программы обеспечения Statsoft Statistica и MS Excel. Результаты. Все изученные прегна-D'-пентараны проявляют достаточно высокое сродство к рецепторам прогестерона клеток HeLa и МНФК. Препараты 19(Е)-19-метоксиимино-3,20-диоксо-16а,17а-циклогексанопрегн-4-ен (III-873) и 16а,17а-циклогексано-5аН-прегнан-3,20-дион (IVк-100) не влияли на жизнеспособность МНФК и эффективно подавляли рост клеток HeLa. Кроме того, эти соединения стимулировали продукцию иммунокомпетентными клетками цитокина ФНО-альфа. Заключение. Из 6 представителей прегна-D'-пентаранов мы выявили два наиболее перспективных соединения - 19(Е)-19-метоксиимино-3,20-диоксо-16а,17а-циклогексанопрегн-4-ен (III-873) и 16а,17а-циклогексано-5aH-прегнан-3,20-дион (IVк-100). Указанные соединения при максимальном подавлении жизнеспособности клеток HeLa не оказывают цитостатического действия на иммунокомпетентные клетки и стимулируют продукцию последними цитотоксического цитокина - ФНО-альфа.