THE IMPORTANCE OF NEUTROPHIL ELASTASE INHIBITOR FOR PANCREATIC CANCER EXTENDING IN EXPERIMENT

Abstract

ZD892- the neutrophil elastase inhibitor possesses ability to block (to slow down) extending of pancreatic cancer cells on the peritoneum, their fixing on it and development of carcinomatosis, it also slows down growth of primary pancreatic tumor. These abilities amplify at joint application ZD892 and xeloda.

Full Text

Заболеваемость раком поджелудочной железы составляет 2,9% от всех злокачественных новообразований, это около 10% всех злокачественных опухолей пищеварительного тракта. Данная опухоль занимает 4-5-е место среди причин смерти от всех злокачественныз опухолей. Самая высокая заболеваемость (> 10 на 100 000 населения) наблюдается в США и Восточной Европе. В структуре злокачественных новообразований в России опухоли поджелудочной железы занимают 8-9-е место, частота их постоянно растет и достигает показателя 9 на 100 000 населения [1]. Результаты лечения рака подже- Для корреспонденции: Фокеев Сергей Дмитриевич — д-р мед. наук, проф. каф. факультетской хирургии им. проф. И.И. Неймарка с курсом хирургии ФПК и ППС; 656038, г. Барнаул, пр. Ленина, 40, e-mail: fokeev.sergey@yandex.ru лудочной железы остаются неудовлетворительными. До 95% больных погибают в течение года после установления диагноза, а пятилетняя выживаемость составляет 3-4% [2—4]. Поздняя диагностика и выявление рака поджелудочной железы в запущенных стадиях является причиной низкого процента радикально пролеченных больных. Увеличению продолжительности жизни могла способствовать системная химиотерапия, но она малоэффективна: ответ на лечение наблюдается менее чем у 20% пациентов [5]. Клиническое улучшение отмечается у 45,4% больных при комбинации гемцитабина и капеци-табина, а медиана выживаемости равна 10 мес [6]. Предполагается, что на развитие опухоли влияют нейтрофилы человека [7, 8]. Проопухолевая деятельность нейтрофилов проявляется чаще всего на более поздних стадиях заболевания. [7, 9, 10]. 32 КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Цель исследования — изучить влияние ингибитора эластазы нейтрофилов на рост и распространение рака поджелудочной железы у мышей в эксперименте. Материал и методы Для оценки эффективности химиотерапевтических препаратов вместе с ингибитором эластазы нейтрофи-лов, использовалась модель протоковой карциномы поджелудочной железы у специального штамма мышей C57BL6, которые были разведены в питомниках Германии, содержались в специальных условиях, без патогенных факторов. В экспериментах были использованы 20 мышей в возрасте от 8—12 нед массой 20—25. По половой принадлежности все они были мужского пола. Животные были разделены на 4 группы. 1-я группа (сравнения) — 5 мышей. В этой группе животным вводили per os физиологический раствор (NaCl). 2-я группа (основная) — 15 животных, она была разделена на 3 подгруппы в зависимости от вводимого per os препарата: 1-я подгруппа — 5 мышей, которым вводился per os ZD0892; 2-я подгруппа — 5 животных, которым вводилась per os кселода. Кселода (капецитабин) — противоопухолевый препарат, производное фторпиримидина карбама-та, антиметаболит; 3-я подгруппа — 5 мышей, которым per os вводились ZD0892 и кселода. Мышам в стерильных условиях, проводился наркоз (Pentobarbitalnarkose — 60 мг /кг), они фиксировались, затем выполнялась срединная лапаротомия, выделялась головка поджелудочной железы (рис.2) и непосредственно в нее вводили 250 тыс. клеток протоковой аденокарциномы поджелудочной железы — 6606 PDA. По завершении введения опухолевых клеток в головку поджелудочной железы, лапаротомная рана ушивалась. Через 2 нед с момента инъекции опухолевых клеток мышам группы сравнения начинали вводить физиологический раствор, а основной группы - ингибитор эластазы нейтрофилов, кселоду и их сочетание. Через 28 дней с момента введения опухолевых клеток (14 дней после начала терапии) при помощи максимальной дозы СО2 по отработанной методике все животные усыплялись для проведения исследования. Всем мышам выполнялась релапаротомия: исследовалась брюшина на канцероматоз, производился лаваж брюшной полости на выявление опухолевых клеток в брюшной полости, удалялась поджелудочная железа для определения наличия первичной опухоли в головке поджелудочной железы. Результаты и обсуждение Изучение результатов эксперимента в обеих группах показало, что у всех экспериментальных мышей определялась первичная опухоль в головке поджелудочной железы, за исключением 3-й подгруппы основной группы (per os вводились ZD0892 и кселода), где в одном наблюдении первичная опухоль не обнаружена. При изучении брюшины на наличие канцероматоза он обнаружен: — в группе сравнения у 4 (80%) животных; — в основной группе в 1-й подгруппе у 2 (40%) мышей, во 2-й подгруппе у 4 (80%) экспериментальных животных, а в 3-й подгруппе у всех исследуемых мышей канцероматоза по брюшине не было (табл. 1). Следовательно, сочетание введения per os ZD0892 и Таблица 1 Наличие у животных первичной опухоли, канцероматоза через 14 дней после начала терапии Группа животных Коли чество Наличие первичной опухоли Наличие канцероматоза абс. % абс. % 1-я — сравнения (0,9% NaCl) 5 5 100 4 80 2-я — основная: 1-я подгруппа (ZD0892) 5 5 100 2 40 2-я подгруппа (ксе-лода) 5 5 100 4 80 3-я подгруппа (ZD0892/ кселода) 5 4 80 — — кселоды блокирует развитие канцероматоза по брюшине у экспериментальных мышей в 100% случаев, подавляет развитие первичной опухоли в поджелудочной железе у 20% животных При изучении объема опухоли в поджелудочной железе у экспериментальных мышей установлено, что в группе сравнения он был — 0,4 см3. Наибольший ее размер определялся у мышей основной группы, которые получали ZD0892 (1-я подгруппа) и составлял 0,7 см3, что меньше на 0,3 см3, чем в группе сравнения. При введении кселоды (2-я подгруппа) опухоль у экспериментальных животных достигала 0,42 см3, что было незначительно больше на 0,02 см3, чем в группе сравнения, и меньше на 0,28 см3, чем в 1-й подгруппе, наименьший объем опухоли выявлен у мышей, получавших сочетание ZD0892 и кселоды (3-я подгруппа) — 0,2 см3, что меньше на 0,2 см3, чем в группе сравнения — 0,4 см3, на 0,5 см3, чем в 1-й подгруппе - 0,7 см3 и на 0,22 см3, чем во 2-й подгруппе — 0,42 см3 (рис. 1). Следовательно, введение per os мышам ZD0892 и кселоды тормозит развитие первичной опухоли в поджелудочной железе. При исследовании промывных вод брюшной полости у экспериментальных мышей на наличие опухолевых клеток установлено, что они были выявлены в большом количестве в группе сравнения (рис. 2) и во 2-й подгруппе (кселода) основной группы (рис. 3). V, см 0,8 η 0,7- 0,6- 0,5- 0,4- 0,3- 0,2- 0,1 - 0- Г руппа сравнения 1-я подгруппа основной группы 2-я подгруппа основной группы 3-я подгруппа основной группы Рис. 1. Объем первичной опухоли через 14 дней после начала терапии в группах эксперимента. 33 РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 5, 2013 Рис. 2. Скопления опухолевых клеток в ла-важной жидкости из брюшной полости у животных группы сравнения. Рис. 3. Скопление опухолевых клеток в ла-важной жидкости из брюшной полости у животных, которым вводилась кселода (2-я подгруппа основной группы). Рис. 4. Единичные опухолевые клетки в лаважной жидкости из брюшной полости у животных, которым вводили ингибитор эластазы нейтрофилов (1-я подгруппа). Рис. 5. Отсутствие опухолевых клеток в лаважной жидкости из брюшной полости у животных, которым вводился ингибитор эластазы нейтрофилов и кселода. 34 КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Таблица 2 Наличие у животных опухолевых клеток в брюшной полости через 14 дней после начала терапии Группа животных Коли чество Наличие опухолевых клеток в брюшной полости 1-я — сравнения (0,9% NaCl) 5 большое количество 2-я — основная: 1-я подгруппа (ZD0892) 2-я подгруппа (кселода) 3-я подгруппа ^Э0892/кселода) Всего... 20 Единичные клетки рака поджелудочной железы обнаружены в лаважной жидкости, у мышей получавших ингибитор эластазы нейтрофилов (ZD0892) — 1-я подгруппа основной группы (рис. 4). Не выявлены опухолевые клетки в лаважной жидкости у животных, которым вводили ZD0892 вместе с ксе-лодой (3-я подгруппа), а встречались лишь лейкоциты в промывных водах брюшной полости (рис. 5; табл. 2). Заключение Сочетание введения per os ZD0892 и кселоды (3-я подгруппа) блокирует развитие канцероматоза по брюшине у экспериментальных мышей в 100% случаев, что подтверждает отсутствие раковых клеток в промывных водах брюшной полости, подавляет развитие первичной опухоли в поджелудочной железе у 20% животных, а у остальных 80% объем первичной опухоли значительно меньше, чем в группе сравнения и в 1-й, 2-й подгруппах основной группы.