Expression of apoptotic (p53, bcl-2, bax) and proliferative (Ki-67, topoisomerase IIa, Ag-NFP-proteins) markers in normal and non-small lung cancer samples

Abstract

Full Text

Цель - исследовать маркеры апоптоза (p53, bcl- 2 и bax) и пролиферации (Ki-67, топоизомеразы IIa (ТороПа) и аргирофильных белков ядрышкообразующих районов (Ag-ЯОР-белков) во взаимосвязи с клинико-морфологическими параметрами немелкоклеточного рака легкого (НМКРЛ) и в норме. Материал и методы. Исследованы 237 операционных материалов НМКРЛ, средний возраст больных - 59 лет, 203 мужчины и 34 женщины. Патогистологическая характеристика опухолей определена согласно классификации TNM 7-го пересмотра. Также исследованы кусочки нормального легкого в 10 случаях. После стандартной проводки приготовлены гистологические срезы толщиной 4 мкм. Иммуноги- стохимическим методом окрашивали на Ki-67 (клон MIB-1), ТороПа (клон JS5B4), р53 (клон DO-7), bcl-2 (клон 124) и bax (клон SP47) и определяли индекс метки (ИМ). Для изучения Ag-ЯОР-белков срезы окрашивали азотнокислым серебром по одностадийной методике. Определяли индекс площади (ИП) Ag- ЯОР-белков в мкм2 в 100 клетках. Компьютерный анализ изображений проводили в программе ImageJ 1.42. Статистический анализ проведен в Statistica 6.0. Применяли U-тест Манна - Уитни, критерий Фишера, коэффициент Спирмена. Достоверность оценивали при р<0,05. Результаты. В ядрах клеток патологически неизмененного эпителия альвеол отсутствовала экспрессия p53, bcl-2 и bax, ИМ Ki-67 и ТороПа составил менее 1%, ИП Ag-ЯОР-белков - 1,31±0,20. В эпителии бронхов отсутствовали р53-положительные клетки, bcl-2-положительные клетки определялись только в базальном слое, bax-положительные клетки - во всех слоях; ИМ Ki-67 составил 4 (1-8)%, ИМ ТороПа - менее 1%, ИП Ag-ЯОР-белков - 1,85±0,24. При НМКРЛ положительная экспрессия p53 составила 104 (44%) случая, bcl-2 - 43 (18%) случая и bax - 130 (55%) случаев; ИМ Ki-67 составил 25 (18-42)%, ИМ ТороПа - 19 (12 - 27)% и ИП Ag-ЯОР-белков - 6,52±1,66. При НМКРЛ наблюдалось снижение экспрессии bax и повышение экспрессии p53, bcl- 2, ИМ Ki-67, ИМ ТороПа и ИП Ag-ЯОР-белков по сравнению с нормальным легким (р<0,001). Найдена корреляция (р<0,05) экспрессии р53, bcl-2 и bax с клинико-морфологическими параметрами НМКРЛ: ИМ bcl-2 и р53 выше при плоскоклеточном раке, ИМ bax выше при аденокарциноме и у женщин, ИМ bcl-2 выше при N0 и I стадии. Отсутствовала корреляция между маркерами апоптоза р53, bcl-2 и bax. В НМКРЛ ИМ Ki-67 и ТороПа имели различия в группах и коррелировали с полом, наибольшим размером опухоли, гистогенезом и дифференцировкой (р<0,01). ИП Ag-ЯОР-белков имел различия в группах и коррелировал с полом, показателем Т, наибольшим размером опухоли, показателем N, стадией заболевания, гистогенезом и дифференцировкой (р<0,001). В НМКРЛ найдена корреляция между маркерами пролиферации - ИП Ag-ЯОР-белков, ИМ Ki-67 и ИМ ТороПа (р<0,001). Найдено увеличение пролиферации при положительной экспрессии р53. При положительной экспрессии bcl-2 уменьшается ИП Ag-ЯОР-белков, bax - ИМ Ki-67 и ТороПа. В НМКРЛ найдена статистически значимая корреляция между маркерами апоптоза (р53, bcl-2 и bax) и пролиферации (Ki-67, ТороПа и Ag-ЯОР-белков): между ИП Ag-ЯОР-белков и р53, bcl-2; между ИМ Ki-67 и р53, bax; между ИМ ТороПа и р53, bax. Заключение. При НМКРЛ по сравнению с нормой изменяется экспрессия маркеров апоптоза и пролиферации. Экспрессия маркеров апоптоза и пролиферации взаимосвязана с полом и клинико-морфологическими параметрами НМКРЛ. При НМКРЛ экспрессия маркеров апоптоза взаимосвязана с пролиферацией.