Сравнительная оценка противоопухолевой активности метионин-γ-лиазы на 2D- и 3D- in vitro моделях опухолей человекака
- Авторы: Каршиева С.Ш.1,2, Демидова Е.А.2, Спирина Т.С.1,2, Бабаева Г.А.1,2, Бондарев Н.А.3, Баженов С.В.3, Манухов И.В.3, Покровский В.С.1,2
-
Учреждения:
- Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы
- Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина
- Московский Физико-технический институт
- Выпуск: Том 29, № 3 (2024)
- Страницы: 234-244
- Раздел: Оригинальные исследования
- Статья получена: 02.12.2024
- Статья одобрена: 09.12.2024
- Статья опубликована: 21.12.2024
- URL: https://rjonco.com/1028-9984/article/view/640835
- DOI: https://doi.org/10.17816/onco640835
- ID: 640835
Цитировать
Полный текст



Аннотация
Обоснование. Многообещающие результаты скрининга противоопухолевых препаратов на монослойных культурах зачастую плохо воспроизводятся на моделях in vivo. Использование для оценки противоопухолевой активности клинически релевантных трёхмерных in vitro моделей опухолей человека, таких как сфероиды, — более надёжная платформа для тестирования лекарств. Это особенно важно для препаратов, действие которых направлено на клеточный метаболизм.
Цель. Сравнительное исследование противоопухолевой активности метионин-γ-лиазы (МГЛ) на 2D- и 3D-моделях опухолей человека.
Материалы и методы. Для оценки цитотоксичности МГЛ использовали клеточную культуру фибробластов человека и опухолевые клеточные линии рака молочной железы человека MCF7, колоректального рака HCT-116, рака поджелудочной железы человека PANC-1, рака печени Huh7, рака предстательной железы человека LNCaP. Для фабрикации сфероидов применяли культуральные планшеты с низкоадгезивным покрытием. Оценку выживаемости клеток проводили с помощью резазуринового теста.
Результаты. На модели сфероидов выживаемость клеток после 72-часовой обработки МГЛ выше, чем на модели монослойной культуры во всех протестированных клеточных культурах. Самой низкой чувствительностью к воздействию МГЛ обладали фибробласты как в 2D-, так и в 3D-модели культивирования: IC50=2,2 и 9,1 ME/мл соответственно. Самая высокая чувствительность к МГЛ на 2D- и 3D-модели выявлена у быстро пролиферирующих клеток PANC-1 и HCT-116: IC50=0,23 и 1,5 МЕ/мл; IC50=0,83 и 1,43 МЕ/мл соответственно.
Заключение. Влияние МГЛ на выживаемость клеток в сфероидах менее выражено, чем в монослое. Выживаемость клеток в сфероидах под воздействием МГЛ не зависит от размера и скорости роста сфероидов. Несмотря на то, что максимальный цитотоксический эффект на сфероидах получен на быстро растущей модели рака толстой кишки HCT-116, а самый низкий — на модели медленно делящихся фибробластов, на других типах клеток эта зависимость не так очевидна. В целом модель сфероидов показала свою полезность для тестирования специфической активности ферментативных противоопухолевых препаратов, так как позволяет избежать гиперчувствительности, характерной для монослойных моделей рака.
Ключевые слова
Полный текст

Об авторах
Саида Шамильевна Каршиева
Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы; Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина
Автор, ответственный за переписку.
Email: skarshieva@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-2469-2315
SPIN-код: 9154-7071
Научно-исследовательский институт молекулярной и клеточной медицины, канд. биол. наук
Россия, Москва; МоскваЕлена Александровна Демидова
Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина
Email: badjito@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-6511-3423
SPIN-код: 5969-2210
Россия, Москва
Татьяна Сергеевна Спирина
Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы; Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина
Email: spirtatjana@yandex.ru
SPIN-код: 8373-1284
Научно-исследовательский институт молекулярной и клеточной медицины
Россия, Москва; МоскваГулалек Аманмырадовна Бабаева
Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы; Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина
Email: gulalek.2020@mail.ru
SPIN-код: 8547-6770
Научно-исследовательский институт молекулярной и клеточной медицины, канд. мед. наук
Россия, Москва; МоскваНиколай Антонович Бондарев
Московский Физико-технический институт
Email: bondarev@mail.ru
Россия, Москва
Сергей Владимирович Баженов
Московский Физико-технический институт
Email: bazhenov1994@gmail.com
SPIN-код: 1147-2678
Россия, Москва
Илья Владимирович Манухов
Московский Физико-технический институт
Email: manukhovi@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-8646-7207
SPIN-код: 3711-4901
д-р биол. наук
Россия, МоскваВадим Сергеевич Покровский
Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы; Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина
Email: v.pokrovsky@ronc.ru
ORCID iD: 0000-0003-4006-9320
SPIN-код: 4552-1226
Научно-исследовательский институт молекулярной и клеточной медицины, д-р мед. наук
Россия, Москва; МоскваСписок литературы
- Barbosa M., Xavier C., Pereira R., et al. 3D Cell Culture Models as Recapitulators of the Tumor Microenvironment for the Screening of Anti-Cancer Drugs // Cancers. 2022. Vol. 14, N 1. P. 190. doi: 10.3390/cancers14010190
- Baker B., Chen C. Deconstructing the third dimension: how 3D culture microenvironments alter cellular cues // J Cell Sci. 2012. Vol. 125, N 13. P. 3015–3024. doi: 10.1242/jcs.079509
- Däster S., Amatruda N., Calabrese D., et al. Induction of hypoxia and necrosis in multicellular tumor spheroids is associated with resistance to chemotherapy treatment // Oncotarget. 2017. Vol. 8, N 1. P. 1725–1736. doi: 10.18632/oncotarget.13857
- Han S., Kwon S., Kim K. Challenges of applying multicellular tumor spheroids in preclinical phase // Cancer Cell Int. 2021. Vol. 21, N 1. P. 152. doi: 10.1186/s12935-021-01853-8
- Koudan E., Kudan S., Karshieva S., et al. The Determination of Cytostatic Activity on a 3D Spheroids-Based Model in Comparison with Conventional Monolayer Culture // Cell Tiss. Biol. 2021. Vol. 15, N 6. P. 522–531. doi: 10.1134/S1990519X21060055
- Морозова Е.А., Куликова В.В., Яшин Д.В., и др. Кинетические характеристики и цитотоксическая активность рекомбинантных препаратов метионин–γ-лиазы Clostridium tetani, Clostridium sporogenes, Porphyromonas gingivalis и Citrobacter freundii // Acta Naturae (русскоязычная версия). 2013. Т. 5, № 3. C 96–102. doi: 10.32607/20758251-2013-5-3-92-98
- Abo Qoura L., Balakin K.V., Hoffman R., Pokrovsky V.S. The potential of methioninase for cancer treatment // Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 2024. Vol. 1879, N 4. P. 189122. doi: 10.1016/j.bbcan.2024.189122
- Pokrovsky V.S., Qoura L.A., Demidova E.A. et al. Targeting Methionine Addiction of Cancer Cells with Methioninase // Biochemistry (Mosc). 2023. Vol. 88, N 7. P. 944–952. doi: 10.1134/S0006297923070076
- Kaiser P. Methionine Dependence of Cancer // Biomolecules. 2020. Vol. 10, N 4. P. 568. doi: 10.3390/biom10040568
- Mecham J., Rowitch D., Wallace C., et al. The metabolic defect of methionine dependence occurs frequently in human tumor cell lines // Biochem Biophys Res Commun. 1983. Vol. 117, N 2. P. 429–434. doi: 10.1016/0006-291x(83)91218-4
- Breillout F., Antoine E., Poupon M. Methionine dependency of malignant tumors: a possible approach for therapy // J Natl Cancer Inst. 1990. Vol. 82, N 20. P. 1628–1632. doi: 10.1093/jnci/82.20.1628
- Garg S., Morehead L., Bird J., et al. Characterization of methionine dependence in melanoma cells // Mol Omics. 2024. Vol. 20, N 1. P. 37–47. doi: 10.1039/d3mo00087g
- Gáti I., Bergström M., Muhr C., et al. Application of (methyl-11C)-methionine in the multicellular spheroid system // J Nucl Med. 1991. Vol. 32, N 12. P. 2258–2265.
- Ануфриева Н.В., Морозова E.A., Куликова В.В., и др. Сульфоксиды – аналоги L-метионина и L-цистеина как пролекарства против грамположительных и грамотрицательных бактерий // Acta Naturae. 2015. Т. 7, №4. C. 128–135. doi: 10.32607/20758251-2015-7-4-128-135
- Pokrovsky V.S., Anisimova N.Yu., Davydov Zh.D., et al. Methionine gamma lyase from Clostridium sporogenes increases the anticancer effect of doxorubicin in A549 cells and human cancer xenografts // Invest New Drugs. 2019. Vol. 37, N 2. P. 201–209. doi: 10.1007/s10637-018-0619-4
- Studier F.W. Protein production by auto-induction in high density shaking cultures. // Protein Expr Purif. 2005. Vol. 41, N 1. P. 207–234. doi: 10.1016/j.pep.2005.01.016
- Манухов И.В., Баженов С.В., Гнучих Е.Ю., и др. Cпособ получения фермента метионин-гамма-лиазы, противоопухолевое лекарственное средство ГЛФ МГЛ на основе этого фермента и применение этого средства для торможения роста опухоли (варианты). Патент на изобретение RU 2733440 C2, 01.10.2020. Заявка № 2018120541 от 04.06.2018. EDN: TDLZWD
- Zanoni M., Piccinini F., Arienti C., et al. 3D tumor spheroid models for in vitro therapeutic screening: a systematic approach to enhance the biological relevance of data obtained // Sci Rep. 2016. Vol. 6. P. 19103. doi: 10.1038/srep19103
- Olejniczak A., Szarynska M., Kmiec Z. In vitro characterization of spheres derived from colorectal cancer cell lines // Int J Oncol. 2018, Vol. 52, N 2. P. 599–612. doi: 10.3892/ijo.2017.4206
- Yeon S., No D., Lee S., et al. Application of concave microwells to pancreatic tumor spheroids enabling anticancer drug evaluation in a clinically relevant drug resistance model // PloS one. 2013. Vol. 8. N 9. P. e73345. doi: 10.1371/journal.pone.0073345
- Costa E., Moreira A., de Melo-Diogo D., et al. 3D tumor spheroids: an overview on the tools and techniques used for their analysis // Biotechnol Adv. 2016. Vol. 34, N 8. P. 1427–1441. doi: 10.1016/j.biotechadv.2016.11.002
- Vynnytska-Myronovska B., Bobak Y., Garbe Y., et al. Single amino acid arginine starvation efficiently sensitizes cancer cells to canavanine treatment and irradiation // Int J Cancer. 2012. Vol. 130, N 9. P. 2164–2175. doi: 10.1002/ijc.26221
- Vynnytska-Myronovska B., Kurlishchuk Y., Bobak Y., et al. Three-dimensional environment renders cancer cells profoundly less susceptible to a single amino acid starvation // Amino Acids. 2013. Vol. 45, N 5. P. 1221–1230. doi: 10.1007/s00726-013-1586-x
- Ghanbari M., Matin M., Mansouri K., Sisakhtnezhad S. Amino acid profile changes during enrichment of spheroid cells with cancer stem cell properties in MCF-7 and MDA-MB-231 cell lines // Cancer Rep (Hoboken). 2023. Vol. 6, N 5. P. e1809. doi: 10.1002/cnr2.1809
- Zhang Q., Li W. Correlation between amino acid metabolism and self-renewal of cancer stem cells: Perspectives in cancer therapy // World J Stem Cells. 2022. Vol. 14, N 4. P. 267-286. doi: 10.4252/wjsc.v14.i4.267
Дополнительные файлы
