TSPO EXPRESSION IN PATIENTS WITH DIFFERENT CLINICAL AND MORPHOLOGICAL TYPES OF RENAL CELL CARCINOMA

Full Text

Периферический бензодиазепиновый рецептор, или белок-транслокатор (TsPO), - внутриклеточный белок молекулярной массой 18 кД. Впервые TsPO описан в 1977 г., причем связывание с ним его лигандов бензодиа-зепинов в периферических тканях было первоначально обнаружено именно в почках. Позже TsPO был выявлен во многих тканях, в частности в сердце, легких, надпочечниках, слюнных железах, лимфоцитах, тромбоцитах, в глиальных клетках нервной системы, в органах репродуктивной системы [4]. В связи с тем что TsPO рассматривают как белок "домашнего хозяйства" (house-keeping protein), показано его участие во многих процессах, касающихся фундаментальных аспектов жизнедеятельности клетки [11]. 20 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ Таблица 1 Уровень экспрессии TsPO у больных ПКР в зависимости от стадии заболевания Стадия Количество TsEn^^re™^ % I 47,3 ± 24,5* III 40,5 ± 23,8* IV 60,3 ± 10,1*, ** Контроль 15,2 ± 1,2 Примечание. Достоверность различий: * - по сравнению с контролем, ** - с другими стадиями ПКР при а < 0,01. Наиболее изученным является участие TsPO в транспорте низкомолекулярных клеточных метаболитов через внешнюю митохондриальную мембрану, в том числе холестерина, что является ключевым этапом в синтезе стероидных гормонов [9, 11]. Исследовано иммуномодулирующее действие TsPO после ишемического повреждения головного мозга и при некоторых нейродеге-неративных заболеваниях [19]. Рядом авторов отмечено участие данного белка в клеточном дыхании и транспорте кальция [8, 13, 19]. Помимо этого, были получены убедительные доказательства роли TsPO в регуляции клеточной пролиферации и апоптоза. В лимфатических тканях TsPO активирует апоптоз тимоцитов посредством снижения митохондриального трансмембранного потенциала [8, 13, 18, 19]. Установлено, что синтетический лиганд TsPO РК11195 способен модулировать уровень клеточной пролиферации. Повышенные уровни экспрессии рецептора были обнаружены в клетках рака молочной железы, толстого кишечника и предстательной железы, причем больше всего это было выражено в Таблица 2 Уровень экспрессии TsPO в зависимости от гистологического варианта ПКР Гистологический вариант ПКР Количество TsPO+-клеток, % Светлоклеточный 34,56 ± 11,9*, ** Хромофобный 39,87 ± 12,5*, ** Папиллярный 53,14 ± 12,9*, *** Саркомоподобный 72,76 ± 15,3*, *** Контроль 15,2 ± 1,2 Примечание. Достоверность различий: * - по сравнению с контролем (а < 0,01), ** - с саркомоподобным и папиллярным вариантами ПКР (а = 0,01), *** - с другими гистологическими вариантами ПКР (а = 0,01). опухолях и линиях раковых клеток, обладающих высоким злокачественным потенциалом [3, 5, 7, 8, 17]. Исходя из биологических особенностей функционирования TsPO, нами был проведен сравнительный анализ уровня экспрессии данного белка в опухолевой ткани больных почечно-клеточным раком (ПКР) для оценки возможности его использования в качестве прогностического маркера. Материал и методы. Под наблюдением находились 89 больных ПКР в возрасте 42-82 лет. Все пациенты были оперированы в объеме радикальной нефрэктомии (п = 79) или резекции почки (п = 10). Полученную во время операции ткань почки фиксировали в 10% растворе формалина, заливали в парафин, после чего изготавливали срезы для иммуногистохимического окрашивания. Образцы подвергали морфологическому исследованию для определения стадии заболевания и гистологическо Различные гистологические варианты ПКР при окрашивании антителами к TsPO. а - саркомоподобный, б - светлоклеточный, в - хромофобный, г - папиллярный. 21 РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 1, 2012 го варианта ПКР. Параллельно срезы толщиной до 5 мкм окрашивали с антителами к TsPO ("Trevigen") в разведении 1:400. Окрашивание проводили согласно стандартным протоколам с использованием системы детекции Ready-to-Use ("NovoLink") и диаминобензидина в качестве хромогена ("BD Biosciences"). В дальнейшем срезы докрашивали гематоксилином. Подсчет положительно окрашенных клеток производили при увеличении 400 с помощью микроскопа Olympus BX-41, оценивали количество положительно окрашенных клеток на 100 клеток. В качестве контроля использовали ткань здоровой почки (п = 8). Положительно окрашенными считали опухолевые клетки с ядрами, окрашенными в коричневый цвет. Статистическую обработку осуществляли с помощью критерия H Крускала-Уоллеса. Результаты и обсуждение. Нами был проведен анализ для выявления возможной связи между уровнем экспрессии TsPO у больных раком почки и рядом факторов: полом и возрастом пациентов, стадией заболевания, гистологическим вариантом ПКР, а также наличием сопутствующей патологии. Среди наблюдаемых больных было 42 (47,2%) женщины и 47 (52,8%) мужчин. Достоверных различий в уровне экспрессии TsPO в зависимости от пола (у мужчин этот показатель составил 47,1%, у женщин -41,5%) и возраста выявлено не было. После оперативного лечения по результатам гистологического исследования I стадия заболевания определена у 12,4% больных, III стадия - у 70,8% и IV стадия -у 16,8%. Выявлено достоверно значимое повышение уровня экспрессии TsPO у больных ПКР по сравнению с группой контроля (а < 0,01). Также установлено, что чем более распространенным является опухолевый процесс, тем выше уровень экспрессии данного белка (табл. 1). При морфологическом исследовании были выделены следующие гистологические варианты ПКР: светлоклеточный (п = 30), хромофобный (п = 30), папиллярный (п = 19), саркомоподобный (п = 10). TsPO визуализировался в опухолевых очагах и в ткани здоровой почки с преимущественно ядерной локализацией (см. рисунок). В контрольной группе уровень TsPO+-клеток составил 15,2%, при светлоклеточном варианте ПКР - 34,6%, при хромофобном варианте -39,9%, при папиллярном - 53,1% и саркомоподобном варианте - 72,8%. Различия между средними значениями числа TsPO+-клеток при всех вариантах ПКР и в контроле, а также между светлоклеточным, хромофобным, папиллярным и саркомоподобным вариантами были достоверны (а < 0,01). Не выявлено достоверных различий между светлоклеточным и хромофобным вариантами ПКР (табл. 2). Интересным является и тот факт, что у 6 (14,6%) наблюдаемых женщин ПКР сочетался с синхронным раком молочной железы. Уровень экспрессии TsPO в этой группе (60,3%) был достоверно выше, чем у женщин, имеющих только ПКР - 41,5% (а < 0,01). В то же время характер течения послеоперационного периода не оказывал существенного влияния на содержание данного белка. У больных ПКР с гладким течением уровень TsPO составил 44,7%, с осложненным - 44,4%. Таким образом, в нашем исследовании установлена зависимость уровня TsPO у больных ПКР от стадии заболевания, гистологического варианта, а также наличия синхронного рака другой локализации. Прогностическое значение размера опухоли, инвазии за пределы капсулы почки, вовлечения в опухолевый процесс надпочечника, лимфатических узлов, венозной инвазии, отдаленных метастазов, объединяемых классификацией TNM, описано у многих исследователей [10, 14]. Нами установлена прямая зависимость уровня экспрессии TsPO от распространенности опухолевого процесса. Так, у больных с диссеминированным ПКР отмечаются более высокие показатели экспрессии TsPO, чем при местно-распространенных и локализованных формах заболевания. Крупных исследований по изучению прогностической роли гистологических вариантов при раке почки немного. В многоцентровом исследовании J.-J. Patard и соавт. [15], включавшем 4063 больных ПКР из 8 международных центров, установлено, что пациенты с хромофобным вариантом ПКР имеют более благоприятный прогноз по сравнению с больными папиллярным и светлоклеточным раком почки. Однако эти различия нивелируются при проведении многофакторного анализа, учитывающего стадию заболевания по системе TNM и степень дифференцировки по Фурману. В другом исследовании, проведенном J. Cheville и со-авт. [1], с участием 2385 пациентов с различными гистологическими вариантами ПКР, продемонстрирован менее благоприятный прогноз у больных со светлоклеточным вариантом (показатель 5-летней выживаемости 68,9%) по сравнению с папиллярным (87,4%) и хромофобным (86,7%). При этом отмечено, что прогностическая значимость гистотипа сохраняется независимо от стадии заболевания и степени ядерной дифференцировки. Наличие саркоматоидного характера опухоли во всех доступных исследованиях ассоциировано с крайне неблагоприятным прогнозом [1, 12]. В нашем исследовании самый высокий уровень TsPO+-клеток определен при саркомоподобном варианте (72,7%), следующим является папиллярный рак (53,1%), наиболее низкий показатель установлен при хромофобном и светлоклеточном вариантах рака почки (39,9 и 34,6% соответственно). Промежуточное прогностическое значение по уровню экспрессии TsPO у больных с папиллярным вариантом ПКР в нашем исследовании можно объяснить неоднородностью данной группы больных. Среди больных папиллярным раком почки большинство авторов [2, 16] традиционно выделяют две прогностические группы в зависимости от типа клеток: I тип - опухолевые клетки малого размера с хромофильной цитоплазмой с низким злокачественным потенциалом, II тип - крупные клетки с эозинофильной цитоплазмой и высокой предрасположенностью к метаста-зированию. Принадлежность клеток папиллярного ПКР к тому или иному типу определяется с помощью генетических и цитогенетических исследований. В нашем исследовании такая дифференциация не проводилась. Таким образом, повышение уровня TsPO у больных ПКР, а также достоверные его различия при различных стадиях и гистологических вариантах рака почки являются свидетельством нарушенного функционирования TsPO при данной патологии. Выявленная зависимость между характером течения ПКР и уровнем TsPO указывает на возможность использования TsPO в качестве маркера при мониторинге больных ПКР для прогнозирования эффективности лечения и течения заболевания.

About the authors

R. A. Zukov

Prof. V. F. Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University

Email: zukov_rus@mail.ru

O. K. Polyakova

Prof. V. F. Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University

T. G. Ruksha

Prof. V. F. Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University

Yu. A. Dykhno

Prof. V. F. Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University

T. V. Maksimova

A. I. Kryzhanovsky Krasnoyarsk Territorial Clinical Oncology Dispensary

References

Supplementary files