Expression and prognostic significance of bcl-2 apoptosis inhibitor in renal cell carcinoma

Full Text

Интерес к изучению маркеров апоптоза и в том числе к экспрессии ингибитора апоптоза bcl-2 при почечно-клеточном раке (ПКР) сохраняется на протяжении последних десятилетий. Роль bcl-2 в развитии и прогрессии ПКР остается спорной [1]. По данным различных авторов, экспрессия данного маркера в карциномах почки колеблется от 32 до 80% [2]. Существует мнение, что сверхэкспрессия bcl-2 может играть важную роль в туморогенезе и резистентности к химиотерапевтическим препаратам и лучевой терапии при раке почки (РП) [3]. Изучению прогностического значения bcl-2 при ПКР посвящено значительное количество исследований. Так, в ряде работ была изучена взаимосвязь экспрессии bcl-2 со степенью анаплазии ПКР. X. Zhang и соавт. [4] обнаружили взаимосвязь между экспрессией bcl-2 и градацией опухоли по Фурману. По данным С.Л. Гуторова и соавт. [5], при отсутствии экспрессии bcl-2 отмечалась тенденция к возрастанию степени анаплазии опухоли. W. Hindermann и соавт. [6] показали, что для карциномы почки со степенью анаплазии GI характерны более высокие значения экспрессии bcl-2, чем степеней GII-III. Этими авторами сделан вывод о том, что прогрессия от высокодифференцированного к низкодифференцированному РП сопровождалась уменьшением экспрессии bcl-2. Аналогичные данные получили и другие исследователи [7]. В то же время S. Vasavada и соавт. [8] не нашли ассоциации между экспрессией bcl-2 и степенью злокачественности опухоли. Исследованию взаимосвязи между активностью bcl-2 и клинической стадией заболевания посвящены немногочисленные работы. S. Oudard и соавт. [9] обнаружили взаимосвязь между высокой экспрессией bcl-2 и низкой стадией заболевания. Сходные данные получили и другие авторы, которые не об- наружили взаимосвязи экспрессии bcl-2 со стадией ПКР [10]. По данным некоторых авторов, экспрессия bcl-2 была взаимосвязана с гистологическим вариантом опухоли [11]. F. Paraf и соавт. [12] показали, что в большинстве светлоклеточных карцином экспрессии данного маркера не обнаруживалось или в них выявлялись редкие положительные клетки, а все папиллярные опухоли были положительны для bcl-2. Другие авторы не нашли взаимосвязи маркера с гистологическим типом опухоли [13]. Так, не было существенного увеличения иммунореактивности белка bcl-2 в саркоматоидных компонентах опухолей по сравнению с другими вариантами ПКР [14]. Имеются работы, посвященные изучению bcl-2 при метастазировании ПКР. По данным О.Б. Лоран и соавт. [15], как для локализованного, так и метастатического РП не были характерны высокие уровни белка bcl-2. Аналогичные данные получил Н.А. Шустицкий [16]. Другие авторы также не обнаружили взаимосвязи между экспрессией bcl-2 и возникновением метастазов. В ряде работ выявлена взаимосвязь между экспрессией bcl-2 и послеоперационным выживанием больных [17], но имеются также работы, в которых такой взаимосвязи обнаружено не было [18]. Таким образом, полученные авторами данные по значению исследования экспрессии ингибитора апоптоза bcl-2 при ПКР противоречивы и поэтому прогностическое значение данного маркера нуждается в дальнейшем изучении. Целью данной работы стали изучение экспрессии ингибитора апоптоза bcl-2 при ПКР и поиск взаимосвязей с прогностическими клинико-морфологическими факторами и послеоперационной выживаемостью больных. Материал и методы Изучен операционный материал 59 больных, оперированных по поводу ПКР в ФГБУ «Алтайский филиал РОНЦ им. Блохина РАМН». Мужчин было 31 (52,5%), женщин - 28 (47,5%). Средний возраст 28 КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Т аблица 1 Корреляционные взаимосвязи экспрессии bcl-2 с прогностическими клинико-морфологическими параметрами ПКР Клинико-морфологиче ский параметр Коэффициент корреляции (r) Достоверность (р) Клиническая стадия 0,31 0,02 Размер опухоли 0,29 0,02 Наличие регионарных и дистантных метастазов -0,35 0,005 Гистологический вариант опухоли 0,41 0,002 Пол пациентов 0,16 - Возраст пациентов 0,17 - Степень анаплазии по Fuhrman 0,19 пациентов составил 56,6 ± 1,3 года. По гистологическому строению опухоли представлены следующим образом: светлоклеточный рак 40; папиллярный рак 15; хромофобный рак 2; веретеноклеточный (саркоматоидный) рак 2. При группировке опухолей по клиническим стадиям (I-IV): I стадии (T1N0M0) соответствовало 31 (52,5%) наблюдение; II стадии (T2N0M0) - 5 (8,5%) наблюдений; III стадии (T1N1M0, T2N1M0, T3N0M0, T3N1M0) - 13 (22 %) и IV стадии (T4N0M0, T4N1M0, TлюбaяN2M1, TлюбaяNлюбaяM1) - 10 (17%) наблюдений. Степень злокачественности опухолей оценивали по S. Fuhrman и соавт. [19]. Изученный нами материал включал 17 (28,8%) опухолей степени анаплазии GI; 15 (25,4%) опухолей степени анаплазии GII; 8 (13,6%) степени анаплазии GIII и 19 (32,2%) степени GIV. Метастатических карцином было 16, локализованных - 43. Средний наибольший размер опухолевого узла составил 7,0 ± 0,4 см. До операции и после больные лекарственного лечения не получали. Материал фиксировали в 10 % нейтральном забу- ференном формалине на протяжении 12-24 ч. Гистологические препараты окрашивали гематоксилином и эозином, на коллаген по ван Г изону и кислые мукополисахариды коллоидным железом по Гале. Экспрессию молекулярно-биологического маркера bcl-2 (клон 124, DAKO) определяли при помощи иммуногистохимического метода по рекомендованному производителем протоколу. При оценке иммуногистохимического (ИГХ) окрашивания bcl-2 использовали полуколичественный метод: 0 баллов - отсутствие окрашивания; + (1 балл) - более 20% клеток со слабой интенсивностью окрашивания цитоплазмы; ++ (2 балла) - умеренное окрашивание цитоплазмы; +++ (3 балла) - более 20% с интенсивным окрашиванием цитоплазмы; ++++ (4 балла) - интенсивное окрашивание цитоплазмы более чем 80% клеток. В тех случаях, когда интенсивность экспрессии варьировала, например от + (1 балл) до ++ (2 балла), получали среднее - 1,5 балла. Сведения о выживаемости больных получали из данных канцер-регистра. Статистическую обработку материала проводили при помощи статистического пакета Statistica 6.0. При нормальном распределении данных при проверке статистических гипотез применяли методы параметрической статистики (t-test Стьюдента), а если полученные данные не соответствовали критериям нормального распределения (критерий Шапиро - Уилка W = 0,89, р < 0,01), то применяли тест Колмогорова - Смирнова или U-тест Манна-Уитни. Данные считали достоверными прир < 0,05. Построение кривых выживаемости проводили по методу Каплана - Мейера, достоверность различий кривых выживания оценивали с помощью log-rank-теста. Результаты и обсуждение Результат ИГХ-выявления ингибитора апоптоза bcl-2 представлен мелкосетчатым, зернистым или диффузным коричневым окрашиванием цитоплазмы опухолевых клеток. Среди всех исследованных больных вне зависимости от изучаемых клинико-морфологических факторов разброс значений экспрессии онкопротеина bcl-2 был от 0 до 4 баллов. В целом среднее значение индекса bcl-2 составило 1,7±0,2 балла, что, по нашему мнению, является невысоким значением. Низкий уровень ингибиции апоптоза обнаружен в 42 (71,2%) опухолях, а высокий - в 17 (28,8%). При высоком уровне ингибиции апоптоза показатель экспрессии Рис. 1. Экспрессия bcl-2 в зависимости от гистологического типа опухоли и наличия метастазов. а - отсутствие экспрессии bcl-2 в метастатическом светлоклеточном раке; б - наличие высокой экспрессии bcl-2 в локализованном папиллярном раке. ИГХ-окрашивание. х400. 29 РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 3, 2015 Рис. 2. Кумулятивная доля 5-летней послеоперационной выживаемости больных ПКР в зависимости от экспрессии bcl-2. bcl-2 в среднем составил 3,3±0,1 балла, а при низком уровне ингибиции апоптоза экспрессия равна 0,93±0,1 балла. Сопоставление выраженности экспрессии bcl-2 c клинико-морфологическими прогностическими факторами ПКР позволило выявить взаимосвязи c клинической стадией (г = 0,31; p = 0,02), размером опухолевого узла (г = 0,29; p = 0,02), наличием регионарных и дистантных метастазов (г = - 0,35; p = 0,005), c гистологическим вариантом опухоли (г = 0,41; p = 0,002). Не было обнаружено взаимосвязи с полом (г = 0,1б; p = 0,22), возрастом больных (г = 0,17; p = 0,22) и градацией опухоли по Фурману (г = 0,19; p = 0,15) (табл.1). Средние значения экспрессии bcl-2 у мужчин составили 1,7±0,2 балла, а у женщин возрастали до 2,1±0,3 балла (табл. 2). В зависимости от возраста средние показатели экспрессии bcl-2 составили у больных в возрасте от 40 до 49 лет 1,6±0,3 балла, от 50 до 59 лет 1,45±0,3 балла, от 60 до 69 лет 1,7±0,3 балла и от 70 до 79 лет 3,0±0,4 балла (см. табл. 2). Таким образом, наиболее высокие показатели экспрессии bcl-2 наблюдали в возрастной группе больных от 70 до 75 лет, а наиболее низкие - в группе от 50 до 59 лет. У пациентов с I клинической стадией заболевания среднее значение экспрессии bcl-2 составило 2,0±0,2 балла, с II стадией - 2,0±0,2 балла, с III стадией - 1,2±0,4 балла и с IV стадией - 1,3±0,2 балла (см. табл. 2). Таким образом, отмечали уменьшение экспрессии онкопротеина по мере увеличения клинической стадии патологического процесса. В зависимости от гистологического варианта ПКР наименьшее среднее значение экспрессии bcl-2 обнаружено при светлоклеточном раке (1,3±0,3 балла). Промежуточное положение занимали веретеноклеточный (2,5±0,3 балла) и хромофобный виды рака (2,0±0,1 балла). Наибольшие показатели bcl-2 отмечены при папиллярном раке (3,1±0,3 балла) (см. табл. 2). С увеличением степени ядерной атипии по Фурману обнаруживали тенденцию к уменьшению экспрессии bcl-2: при GI экспрессия составила 2,1±0,3 Таблица 2 Экспрессия bcl-2 в клетках опухоли в зависимости от клиникоморфологических параметров ПКР Клинико-морфологический параметр Экспрессия bcl-2, баллы Достоверность, p Пол: мужской 1,7 ± 0,2 женский 2,1 ± 0,3 - Возраст, годы: 40-49 1,6 ± 0,3 50-59 1,45 ± 0,3 - 60-69 1,7 ± 0,3 - 70-79 3,0 ± 0,4 - Стадия TNM: I 2,0 ± 0,2 II 2,0 ± 0,2 - III 1,2 ± 0,4 0,04 IV 1,3 ± 0,2 - Гистологический вариант опухоли: светлоклеточный 1,3 ± 0,3 хромофобный 2,0 ± 0,1 веретеноклеточный 2,5 ± 0,3 папиллярный 3,1 ± 0,3 0,01 Градация ядра по Фурману: GI 2,1 ± 0,3 GII 2,1 ± 0,4 - GIII 1,4 ± 0,3 - GIV 1,5 ± 0,3 - Размер опухолевого узла, см: менее 7 2,0 ± 0,2 7 и более 1,1 ± 0,2 0,02 Регионарные и отдаленные метастазы: отсутствуют 1,9 ± 0,3 имеются 0,9 ± 0,2 0,007 балла, при GII - 2,1±0,4 балла, при GIII - 1,4±0,6 балла и при GIV - 1,5±0,3 балла (см. табл. 2). При размере опухолевого узла менее 7 см экспрессия маркера была равной 2,0±0,2 балла, а при величине опухоли 7 см и более достоверно уменьшалась до 1,1±0,2 балла (см. табл. 2). В локализованных опухолях экспрессия bcl-2 составила 1,9±0,2 балла, а в метастатических она достоверно снижалась до 0,9±0,2 балла (см. табл. 2; рис. 1). Анализ 5-летней послеоперационной выживаемости больных по Каплану - Мейеру, в зависимости от уровня экспрессии онкопротеина bcl-2 показал, что когда экспрессия bcl-2 была 3 балла и более, то кумулятивная доля выживших к 1800-му дню составила 0,91, а когда экспрессия bcl-2 была 2 балла и менее, тогда ни один пациент не дожил до 5 лет. При сравнении кривых выживаемости больных с использованием логарифмического рангового критерия 30 КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ было получено, что различия кривых достоверны (log-rank-test; p = 0,003) (см. рис. 2.). Таким образом, результаты проведенного исследования показали, что в целом для РП характерны низкие показатели экспрессии ингибитора апоптоза bcl-2. Обнаружены взаимосвязи экспрессии bcl-2 с клинической стадией, размером опухолевого узла, гистологическим типом опухоли, наличием метастазов, поэтому исследование экспрессии bcl-2 может быть использовано в качестве дополнительного фактора прогноза при ПКР. Отсутствие экспрессии bcl-2 в клетках опухоли может служить критерием вероятного возникновения метастазов. Экспрессия bcl-2 влияла на 5-летнию послеоперационную выживаемость больных, низкий уровень экспрессии bcl-2 - неблагоприятный фактор прогноза послеоперационной выживаемости больных ПКР.

About the authors

Tat’yana M. Cherdantseva

The Altai State Medical University

Email: drakon@agmu.ru
MD, PhD 656038, Barnaul, Russian Federation

I. P Bobrov

The Altai State Medical University

656038, Barnaul, Russian Federation

A. F Lazarev

N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center

The Altai Branch 656049, Barnaul, Russian Federation

V. V Klimachev

The Altai State Medical University

656038, Barnaul, Russian Federation

A. M Avdalyan

The Altai State Medical University

656038, Barnaul, Russian Federation

References

Supplementary files