Heterozygocity loss in P21 (A1026G and G369C) gene in lung cancer patients

Abstract

Full Text

Актуальность. П юдукт гена р21 является супрессорным белком, который препятствует делению клетки, блокируя продвижение по постсинтетиче- ской фазе G2 и вход в митоз. Ген р21 является одной из основных мишеней трансактивационного действия р53, ключевого регулятора, который может координировать процесс репарации либо индуцировать апоптоз. Поэтому любые изменения в функционировании гена р21 могут нарушить неустойчивое равновесие механизмов, регулирующих клеточный цикл, и оказать онкогенное влияние. Задачи исследования - провести анализ потери гетерозиготности в генер21 (A1026G и G369C) в ткани опухоли легкого. Материал и методы. В работе исследовано 93 парных ДНК-образца, полученных из операционного материала (опухолевая ткань легкого и соответствующие им образцы гистологически не измененной легочной паренхимы) больных центральным раком легкого. Выделение геномной ДНК проводили из парафиновых блоков с использованием коммерческого набора FF-PET DNA kit (Qiagen, Германия), следуя инструкции производителя. Парафиновые срезы, полученные методом стереотак- тической диссекции под контролем световой микроскопии, депарафинизировали с использованием ксилола и этанола. Поиск потери гетерозиготности биаллельных локусов гена р21 (A1026G и G369C) проводили путем сравнительного генотипирования опухолевой ткани и ткани, взятой на границе резекции. Типирование образцов по полиморфизмам исследуемого гена проводили путем ПЦР-ПДРФ (полимеразная цепная реакция-полиморфизм длины рестрикционных фрагментов)-анализа. Продукты ПДРФ анализировали в 4% агарозном геле с добавлением бромистого этидия и визуализировали в проходящем УФ-свете. Результаты. Исследование А1026G-полимор- физма гена р21 обнаружило явление потери гетерози- готности в данном локусе при раке легкого. Анализ показал статистически значимое (р=0,005) увеличение частоты встречаемости гомозиготного АА-генотипа (73,12%) и уменьшение частоты гетерозиготного AG- генотипа (13,98%) в опухолевой ткани по сравнению с таковыми показателями в нормальной ткани (55,91 и 34,41% соответственно). Различий в распределении генотипов гена р21 G369C между опухолевой и нормальной тканью легкого выявлено не было. Заключение. Показано явление потери гетерози- готности для полиморфизма A1026G гена р21 у больных раком легкого. В этом случае снижается транскрипционная активность супрессорного гена за счет утраты протективного G-аллеля.