Отправить статью по E-mail Прогностическое значение количественной оценки содержания макрофагов (CD68+) в перитуморозной зоне светлоклеточного рака почки
- Авторы: Бобров И.П.1, Лазарев А.Ф.1, Черданцева Т.М.2, Климачев И.В.1, Климачев Владимир Васильевич В.В.1, Мяделец М.Н.1, Лепилов А.В.1, Долгатов А.Ю.1, Корсиков Н.А.1, Долгатова Е.С.1, Лушникова Е.Л.3, Бакарев М.А.3
-
Учреждения:
- ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет»
- ГБОУ ВПО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова»
- Институт молекулярной патологии и патоморфологии
- Выпуск: Том 26, № 2 (2021)
- Страницы: 49-56
- Раздел: Оригинальные исследования
- Статья опубликована: 15.04.2021
- URL: https://rjonco.com/1028-9984/article/view/107125
- DOI: https://doi.org/10.17816/1028-9984-2021-26-2-49-56
- ID: 107125
Цитировать
Полный текст
Открытый доступ
Доступ предоставлен
Доступ платный или только для подписчиков
Аннотация
Цель. Количественный анализ плотности распределения макрофагов (МФ) в перитуморозной зоне (ПЗ) светлоклеточного рака почки (СРП) и определение взаимосвязи плотности распределения МФ в ПЗ с клинико-морфологическими факторами прогноза и послеоперационной выживаемостью больных.
Материалы и методы. В исследование было включено 52 пациента с СРП, средний возраст больных составлял 56,7±0,8 лет. Макрофаги выявляли в парафиновых срезах иммуногистохимическим методом с помощью моноклональных мышиных антител к CD68 (клон PG-M1, DAKO). Высчитывали среднее количество МФ в ПЗ в 3 полях зрения при увеличении микроскопа х 400 (за ПЗ принимали ткань непосредственно прилежащую к опухоли до условно неизменённой ткани почки).
Результаты. При корреляционном анализе выявлено, что плотность распределения МФ в ПЗ СРП была взаимо- связана: со стадией заболевания (r=0,66; p=0,0001); размером опухолевого узла (r=0,52; p=0,0001); степенью анаплазии по Fuhrman (r=0,80; p=0,0001); наличием метастазов (r=0,62; p=0,0001) и послеоперационной выживаемостью больных (r=0,53; p=0,0001). Не было обнаружено корреляционных взаимосвязей с полом (r=0,007; p=0,62) и возрастом пациентов (r=0,03; p=0,83). При числе МФ в ПЗ <8,8 кумулятивная доля выживших к 5-летнему сроку составляла – 0,70 (70%), а когда число МФ в ПЗ было ≥8,8, то до 5-летнего срока не дожил ни один из пациентов, кумулятивная доля выживших при этом составила 0 (log-rank-test, p=0,000001).
Выводы. Плотность распределения МФ в ПЗ была взаимосвязана с важными клинико-морфологическими параметрами СРП и являлась предиктором прогноза 5-летней послеоперационной выживаемости больных. Количественная оценка числа МФ в ПЗ может быть использована при прогнозировании течения СРП в качестве дополнительного фактора, в совокупности с традиционными классическими факторами прогноза.
Ключевые слова
Полный текст
Интерес к изучению опухолевого микроокружения сохраняется на протяжении последних десятилетий [1–5]. По современным представлениям интратуморальные макрофаги (МФ) играют важнейшую роль в микроокружении опухолевых клеток и прогрессии рака. Посредством продукции факторов роста (bFGF, GM-CSF, TGF-α, IGF-I, PDGF, VEGF/VPF, TGF-β), цитокинов и монокинов (IL-1, IL-6, IL-8, TNF-α, субстанции P, простагландинов, интерферонов, тромбоспондина 1) и металлопротеиназ (ММР-2, ММР-9) МФ способны стимулировать пролиферацию опухолевых клеток, ремоделировать строму, индуцировать ангиогенез, активировать инвазию и метастазирование карцином [6].
Неблагоприятное прогностическое значение высокой плотности распределения МФ в строме опухоли показано при раке лёгкого [7], раке желудка [8], раке молочной железы [9], раке толстой кишки [10] и раке пищевода [11].
В то же время работ, посвящённых изучению прогностического значения МФ при раке почки, в литературе имеется небольшое количество. Высокое содержание МФ в строме рака почки, по данным отдельных авторов, коррелировало с возникновением метастазов [12, 13]. Toge H. и соавт. (2009) показали, что значительное число МФ в карциномах было взаимосвязано с развитием рецидивов после лечения [14]. Но Hutterer G.C. и соавт. (2013), напротив, выявили, что присутствие МФ в опухоли было ассоциировано с благоприятным течением новообразования: низкой клинической стадией, малым размером опухолевого узла, низкой степенью атипии опухолевых клеток по Fuhrman и отсутствием метастазов в лимфатические узлы [15].
Таким образом, работы, посвящённые изучению прогностического значения исследования МФ при почечно-клеточном раке немногочисленны и противоречивы, а работ, посвящённых изучению МФ в перитуморозной зоне (ПЗ) светлоклеточного рака почки (СРП), как фактору прогноза, в литературе нами не обнаружено.
Таким образом, целью данного исследования являлся количественный анализ МФ в ПЗ СРП, определение взаимосвязей с клинико-морфологическими факторами прогноза и послеоперационной выживаемостью больных.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Изучен операционный материал 52 больных СРП. Средний возраст пациентов составил 56,7±0,8 года. Мужчин было 29 (55,8%), женщин – 23 (44,2%).
При распределении пациентов по стадиям заболевания:
- Ι клинической стадии (T1N0M0) соответствовали 25 (48%) наблюдений;
- ΙΙ стадии (T2N0M0) – 7 (13,5 %);
- ΙΙΙ стадии (T1N1M0, T2N1M0, T3N0M0, T3N1M0) – 13 (25 %);
- ΙV стадии (T4N0M0, T4N1M0, TлюбаяN2M1, TлюбаяNлюбаяM1) – 7 (13,5 %).
Степень злокачественности опухолевых клеток оценивали по Fuhrman S.A. Степени анаплазии GI соответствовали 17 опухолей (32,7 %), степени анаплазии GII – 11 (21,1 %), степени анаплазии GIII – 14 (26,9 %) и степени анаплазии GIV – 10 (19,3 %).
Карцином с регионарными и отдалёнными метастазами было 13 (25 %), локализованных опухолей было – 39 (75 %).
Средний размер опухолевого узла составил – 6,9±0,3 см.
Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального забуференного формалина в течение 24 ч. Макрофаги выявляли иммуногистохимическим методом с помощью моноклональных мышиных антител к CD68 (клон PG-M1, DAKO) по рекомендованному производителем протоколу. Высчитывали среднее количество МФ в ПЗ в 3 полях зрения (за ПЗ принимали ткань, непосредственно прилежащую к опухоли и расположенную до условно неизменной ткани почки) при увеличении микроскопа х 400 с помощью программы Image Tool. 3.0.
Статистическую обработку материала проводили при помощи статистического пакета Statistica 10.0. При нормальном распределении данных при проверке статистических гипотез применяли методы параметрической статистики (t-test Стьюдента), а если полученные данные не соответствовали критериям нормального распределения (критерий Шапиро – Уилка W=0,89, p <0,01), то применяли тест Колмогорова – Смирнова или U-тест Манна – Уитни. Корреляционные взаимосвязи определяли путём расчёта коэффициента Пирсона (r). Анализ выживаемости проводили по методу Каплан – Мейера с определением кумулятивной доли выживших, достоверность различий кривых выживаемости оценивали с помощью критерия – log-rank test. Данные считали достоверными при р <0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
При корреляционном анализе выявлено, что плотность распределения МФ в ПЗ СРП была достоверно взаимо- связана со стадией заболевания; размером опухолевого узла; степенью анаплазии по Fuhrman; наличием метастазов и послеоперационной выживаемостью больных. Не было обнаружено корреляционных взаимосвязей с полом и возрастом пациентов (табл. 1).
Таблица 1. Корреляционные взаимосвязи плотности распределения МФ в ПЗ с клинико-морфологическими особенностями СРП
Table 1. Correlational relationships of macrophages distribution density in peritumoroznoy zone with clinical and morphological features of clear cell kidney cancer
Клинико-морфологический параметр | Коэффициент корреляции (r) | р |
Пол пациентов | 0,07 | 0,62 |
Возраст пациентов | 0,03 | 0,83 |
Клиническая стадия заболевания | 0,66 | 0,0001 |
Размер опухолевого узла | 0,52 | 0,0001 |
Степень анаплазии опухоли по Fuhrman | 0,80 | 0,0001 |
Наличие метастазов | 0,62 | 0,0001 |
Послеоперационная выживаемость больных | 0,53 | 0,0001 |
Количественный анализ содержания МФ в ПЗ в зависимости от пола пациентов позволил выявить, что среднее значение числа МФ в ПЗ в 3 полях зрения при увеличении х 400 у мужчин составило 9,5±1,1, а у женщин – 7,8±1,1 (p=0,3) (табл. 2).
Таблица 2. Содержание МФ в ПЗ карцином в зависимости от клинико-морфологических особенностей СРП
Table 2. The content of macrophages in peritumoroznoy zone carcinomas depending on the clinical and morphological features of clear cell kidney cancer
Клинико-морфологический параметр | Количество МФ в ПЗ | р |
Пол: мужской женский | 9,5±1,1 7,8±1,1 | 0,6 |
Возраст, лет: 30–39 40–49 50–59 60–69 70–79 | 2,0±0,1 11,8±2,0 7,3±0,9 8,0±1,2 10,8±4,4 | 0,2 0,03 0,6 0,4 |
Стадия TNM: І ІІ ІІІ ІV | 3,1±0,3 7,5±2,6 15,7±1,7 16,7± 1,8 | 0,003 0,009 0,7 |
Степень атипии GІ по Fuhrman: GІІ GІІІ GІV | 2,5±0,2 2,3±0,2 11,6±1,2 22,1±1,8 | 0,5 0,0000001 0,000005 |
Размер опухолевого <7 узла, см: ≥7 | 4,2±0,6 13,1±1,2 | 0,0000001 |
Метастазы: N0 N+ | 5,4±0,6 17,7±1,6 | 0,0000001 |
При анализе количества МФ в ПЗ в зависимости от возраста пациентов выявлено, что наименьшие низкие значения числа МФ были в возрастной группе больных от 30 до 39 лет, а наиболее высокие – в возрастных группах 40–49 лет и 70–79 лет (табл. 2). Таким образом, наблюдалась тенденция к увеличению МФ в ПЗ опухолей в зависимости от увеличения возраста больных.
Подсчёт числа МФ в ПЗ в зависимости от клинической стадии СРП показал, что при II стадии по сравнению с I стадией содержания МФ возрастало в 2,4 раза, при III стадии по сравнению со II стадией в 2,1 раза и при IV стадии имелась тенденция к возрастанию по сравнению с III стадией, но данные оказались недостоверны (см. табл. 2). Таким образом, в продвинутых стадиях заболевания отмечали возрастание числа МФ в ПЗ карцином.
В зависимости от степени ядерной атипии по Fuhrman выявлено, что существовали достоверные отличия по содержанию МФ в ПЗ между карциномами со степенями GII-GIII и GIII-GIV, но не было обнаружено достоверных различий между степенями GI и GII. Таким образом, при более высоких степенях ядерной атипии (GIII и GIV) число МФ в ПЗ значительно возрастало (в 5 и 9,6 раза) (см. табл. 2).
При размере опухолевого узла ≥7 см (данный размер опухоли, поскольку он явился медианой, был избран контрольной точкой отсчёта) количество МФ в ПЗ было больше в 3,1 раза, чем в карциномах размером <7 см (см. табл. 2).
Метастатический потенциал также оказывал значительное влияние на плотность распределения МФ в ПЗ карцином. При местнораспространённом СРП количество МФ возрастало в 3,3 раза по сравнению с локализованными опухолями (рис. 1 а, б; см. табл. 2).
Рис. 1. Плотность распределения МФ в ПЗ в зависимости от метастатического потенциала карцином. а – малое число небольших МФ в ПЗ локализованной опухоли (ув. 400); b – большое количество крупных МФ в ПЗ метастатической опухоли (ув. 400). Иммуногистохимическая реакция на CD68.
Fig. 1. The density of the macrophages distribution in the peritumoroznoy zone depends on the metastatic potential of the carcinomas. a – a small number of small macrophages in the peritumoroznoy zone of a localized tumor (× 400); b – a large number of large macrophages in the of a metastatic tumor (× 400). Immunohistochemical reaction to CD68.
При анализе 5-летней послеоперационной выживаемости больных по методу Каплан – Майера в зависимости от плотности распределения МФ в ПЗ карцином графическое отображение анализа показало следующее. Если число МФ в ПЗ было <8,8, то кумулятивная доля выживших к 5-летнему сроку составляло 0,70 (70%), а когда число МФ в ПЗ было ≥8,8, то до 5-летнего срока не дожил ни один из пациентов, кумулятивная доля выживших составила 0. При сравнительном анализе с использованием log-rank-критерия выявлено, что различия между кривыми выживания в группах исследования были достоверны (p=0,000001) (рис. 2).
Рис. 2. Анализ выживаемости больных светлоклеточным раком почки в зависимости от плотности распределения МФ в ПЗ опухоли.
Fig. 2. Analysis of the survival rate of patients with clear cell kidney cancer depending on the density of the distribution of macrophages in the tumor peritumoroznoy zone.
ВЫВОДЫ
Плотность распределения макрофагов в перитуморозной зоне взаимосвязана с важнейшими клинико-морфологическими факторами прогноза светлоклеточного рака почки.
Плотность распределения макрофагов в перитуморозной зоне является фактором прогноза 5-летней послеоперационной выживаемости больных светлоклеточным раком почки.
Количественная оценка числа макрофагов в перитуморозной зоне может быть использована при прогнозировании течения светлоклеточного рака почки в качестве дополнительного фактора, в совокупности с традиционными классическими факторами прогноза.
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ / ADDITIONAL INFO
Источник финансирования. Авторы заявляют об отсутствии внешнего финансирования при проведении исследования.
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.
Вклад авторов. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства международным критериям ICMJE (все авторы внесли существенный вклад в разработку концепции, проведение исследования и подготовку статьи, прочли и одобрили финальную версию перед публикацией).
Funding source. This study was not supported by any external sources of funding.
Competing interests. The authors declare that they have no competing interests.
Author contribution. All authors confirm the compliance of their authorship, according to international ICMJE criteria (all authors made a substantial contribution to the conception of the work, acquisition, analysis, interpretation of data for the work, drafting and revising the work, final approval of the version to be published.
Об авторах
Игорь Петрович Бобров
ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет»
Email: ig.bobrov2010@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-9097-6733
SPIN-код: 2375-1427
д.м.н., профессор
Россия, БарнаулАлександр Федорович Лазарев
ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет»
Email: lazarev@arzs.ru
ORCID iD: 0000-0003-1080-5294
SPIN-код: 1161-8387
д.м.н., профессор
Россия, БарнаулТатьяна Михайловна Черданцева
ГБОУ ВПО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова»
Email: cherdan.morf@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-7292-4996
SPIN-код: 3773-8785
д.м.н., доцент
Россия, РязаньИлья Владимирович Климачев
ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет»
Email: k0222@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-9889-9517
врач-патологоанатом
Россия, БарнаулВладимир Васильевич Климачев Владимир Васильевич
ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет»
Email: pathology_agmu@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-1586-252X
SPIN-код: 8120-3059
д.м.н., профессор
Россия, БарнаулМихаил Николаевич Мяделец
ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет»
Email: pathology_agmu@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-3256-6706
к.м.н., врач-патологоанатом
Россия, БарнаулАлександр Васильевич Лепилов
ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет»
Email: lepilov@list.ru
ORCID iD: 0000-0003-2477-4687
SPIN-код: 7516-0963
д.м.н., профессор
Россия, БарнаулАндрей Юрьевич Долгатов
ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет»
Автор, ответственный за переписку.
Email: adolgatov@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-7677-4622
SPIN-код: 2804-0011
к.м.н., доцент
Россия, БарнаулНиколай Алексеевич Корсиков
ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет»
Email: nikkor94knaagmu@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-0094-4656
Россия, Барнаул
Елена Сергеевна Долгатова
ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет»
Email: esdol82@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-6678-4472
Россия, Барнаул
Елена Леонидовна Лушникова
Институт молекулярной патологии и патоморфологии
Email: pathol@inbox.ru
ORCID iD: 0000-0002-2614-8690
SPIN-код: 3310-1175
д.м.н., профессор
Россия, НовосибирскМаксим Александрович Бакарев
Институт молекулярной патологии и патоморфологии
Email: pathol@inbox.ru
ORCID iD: 0000-0002-9614-592X
SPIN-код: 3630-9977
д.м.н., профессор
Россия, НовосибирскСписок литературы
- Messex J.K., Byrd C.J., Liou G.Y. Signaling of Macrophages that Contours the Tumor Microenvironment for Promoting Cancer Development // Cells. 2020. Vol. 9, N 4. P. doi: 10.3390/cells9040919
- Лазарев А.Ф., Бобров И.П., Черданцева Т.М., и др. Тучные клетки и опухолевый рост // Сибирский онкологический журнал. 2011. Т. 46, № 4. С. 59–63.
- Бобров И.П., Черданцева Т.М., Долгатова Е.С., и др. Прогностическое значение количественной оценки В-лимфоцитов в перитуморозной зоне рака почки // Современные проблемы науки и образования. 2021. № 2. С. 172.
- Черданцева Т.М., Бобров И.П., Авдалян А.М., и др. Тучные клетки при раке почки: клинико-морфологические взаимосвязи и прогноз // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2017. Т. 163, № 6. С. 768–773.
- Казарцев А.В., Черданцева Т.М., Бобров И.П., и др. Интратуморальные стромальные тучные клетки при почечно-клеточном раке: клинико-морфологические сопоставления // Российский онкологический журнал. 2017. Т. 22, № 1. С. 21–25.
- Siveen K.S., Kuttan G. Role of macrophages in tumour progression // Immunol Lett. 2009. Vol. 123, N 2. P. 97–102. doi: 10.1016/j.imlet.2009.02.011
- Sumitomo R., Hirai T., Fujita M., et al. M2 tumor-associated macrophages promote tumor progression in non-small-cell lung cancer // Exp Ther Med. 2019. Vol. 18, N 6. P. 4490–4498. doi: 10.3892/etm.2019.8068
- Song H., Wang T., Tian L., et al. Macrophages on the Peritoneum are involved in Gastric Cancer Peritoneal Metastasis // J Cancer. 2019. Vol. 10, N 22. P. 5377–5387. doi: 10.7150/jca.31787
- Choi J., Gyamfi J., Jang H., Koo J.S. The role of tumor-associated macrophage in breast cancer biology // Histol Histopathol. 2018. Vol. 33, N 2. P. 133–145. doi: 10.14670/HH-11-916
- Waniczek D., Lorenc Z., Snietura M., et al. Tumor-Associated Macrophages and Regulatory T Cells Infiltration and the Clinical Outcome in Colorectal Cancer // Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2017. Vol. 65, N 5. P. 445–454. doi: 10.1007/s00005-017-0463-9
- Sugimura K., Miyata H., Tanaka K., et al. High infiltration of tumor-associated macrophages is associated with a poor response to chemotherapy and poor prognosis of patients undergoing neoadjuvant chemotherapy for esophageal cancer // J Surg Oncol. 2015. Vol. 111, N 6. P. 752–759. doi: 10.1002/jso.23881
- Hamada I., Kato M., Yamasaki T., et al. Clinical effects of tumor-associated macrophages and dendritic cells on renal cell carcinoma // Anticancer Res. 2002. Vol. 22, N 6C. P. 4281–4284.
- Santoni M., Massari F., Amantini C., et al. Emerging role of tumor-associated macrophages as therapeutic targets in patients with metastatic renal cell carcinoma // Cancer Immunol Immunother. 2013. Vol. 62, N 12. P. 1757–1768. doi: 10.1007/s00262-013-1487-6
- Toge H., Inagaki T., Kojimoto Y., et al. Angiogenesis in renal cell carcinoma: the role of tumor-associated macrophages // Int J Urol. 2009. Vol. 16, N 10. P. 801–807. doi: 10.1111/j.1442-2042.2009.02377.x
- Hutterer G.C., Pichler M., Chromecki T.F., et al. Tumour-associated macrophages might represent a favourable prognostic indicator in patients with papillary renal cell carcinoma // Histopathology. 2013. Vol. 63, N 3. P. 309–315. doi: 10.1111/his.12163
Дополнительные файлы
