Специфическая иммунотерапия и клеточный иммунитет у больных ра-ком шейки матки

Аннотация

Определено воздействие сочетания противоопухолевой и иммунотерапии на состояние клеточного звена иммунитета у больных раком шейки матки I—IIA стадии. Выявлены снижение показателей системы иммунитета у обследованных больных и умеренная динамика к повышению их в ходе лечения, не сопровождающаяся адекватным восстановлением числа клеток с киллерной функцией.

Полный текст

Механизмы клеточного иммунитета являются ключе- выми в структуре иммунологических компонентов про- тивоопухолевой защиты организма. В то же время именно они являются наиболее уязвимыми для воздействия небла- гоприятных факторов, как самого опухолевого роста, так и проводимого противоопухолевого лечения [1—3]. Следует иметь в виду также тот факт, что если им- мунные механизмы не предотвратили развитие пер- вичной опухоли, то не следует ожидать от них полной эффективности и после проведения лечения и любая оставшаяся в организме клетка новообразования мо- жет стать родоначальником нового клона опухолевых клеток — как в исходной зоне локализации рака, так и в виде отдаленного метастаза. Несмотра на то что раннее оперативное и комбини- рованное лечение считается наиболее адекватным для излечения больных с новообразованиями, в зависимо- сти от типа опухоли наблюдается большая или меньшая частота рецидивирования процесса. Предотвращение его — одна из ключевых задач современной онкологии. Известно, что любое оперативное вмешательство, в осо- бенности осуществляемое на фоне первичного иммуно- дефицитного состояния, способствует снижению мор- фофункциональных показателей иммунной системы [4]. Осуществление лучевой терапии у больных раком шейки матки (РШМ) также сопряжено с довольно зна- чительным радиационным воздействием на организм в целом. В первую очередь при этом поражаются имму- нокомпетентые клетки, находящиеся в периферической крови [5]. Значительная длительность процедуры и её многократное повторение в процессе лучевой терапии приводят к облучению значительной части пула цирку- лирующих иммуноцитов [6]. На этом фоне проведение Для корреспонденции: Кенбаева Динара Кумаровна — канд. мед. наук, зав. отд-нием гинекологии; 010009, Республика Казах- стан, г. Астана, ул. Манаса, 16, e-mail: dikenb@mail.ru. специфической иммунотерапии может быть малоэффек- тивным или вообще не давать позитивных результатов в связи с глубоким угнетением защитных механизмов [7]. В настоящее время продолжается разработка мето- дов повышения общей и противоопухолевой активности иммунной системы с целью профилактики постлучевого иммунодефицита и улучшения клинических результатов лечения больных со злокачественными новообразовани- ями различной природы [8, 9]. Одним из позитивных эффектов иммуномодуляции может оказаться потенци- рование результатов специфической иммунотерапии. Цель исследования — определить воздействие спец- ифической иммунотерапии на показатели клеточного звена иммунной системы у больных РШМ. Материал и методы Всего в рамках проведенного клинико-иммунологи- ческого исследования обследованы 88 больных РШМ I—IIA клинической стадии (Т1аN0M0- Т2аN0M0), под- вергавшихся оперативному лечению (I стадия) и ком- бинированному лечению с дистанционной гамма-те- рапией — ДГТ (IIA стадия). Все больные находились в возрасте от 30 до 70 лет. ДГТ в статическом или подвижном режиме прово- дили на область первичной опухоли и зоны возможного параметрального и лимфогенного распространения опу- холи, чередуя с сеансами внутриполостной гамма-тера- пии. Суммарная очаговая доза в точке В от дистанцион- ного облучения составила 40 Гр. Все больные были распределены на 2 группы в зави- симости от проводимой терапии. В 1-ю включены паци- енты, получавшие только оперативное лечение + ДГТ, во 2-ю — больные, получавшие сочетание операция+ДГТ и специфическую иммунотерапию (СИТ) по разработан- ной методике, которая включала инкубацию аутолимфо- цитов с опухолевыми антигенами и стимулятором роста Т-лимфоцитов и хелперным фактором для киллеров (ин- 42 КЛИНИЧЕСКИЕ НАБЛЮДЕНИЯ Т а б лица 1 Особенности показателей клеточного звена иммунитета у больных РШМ IA стадии при проведении СИТ после оперативного вмешательства Лимфоциты общие, ∙ 109/л 2,10±0,09 2,15±0,13 2,36±0,16 1/1 >0,05 2/1 >0,05 3/1 >0,05 CD3+, ∙ 109/л 1,45±0,06 1,27±0,08 1,52±0,10 >0,05 >0,05 <0,05 CD3+CD4+, ∙ 109/л 0,89±0,05 0,76±0,06 0,92±0,08 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD8+, ∙ 109/л 0,39±0,02 0,40±0,03 0,45±0,03 >0,05 >0,05 >0,05 CD3-CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,17±0,01 0,11±0,01 0,16±0,02 <0,05 <0,05 <0,05 CD3+CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,11±0,01 0,09±0,01 0,12±0,01 <0,05 >0,05 <0,05 CD19+, ∙ 109/л 0,24±0,02 0,31±0,02 0,28±0,02 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD25+, ∙ 109/л 0,21±0,01 0,22±0,02 0,27±0,02 <0,05 <0,05 >0,05 CD95+, ∙ 109/л 0,91±0,07 0,75±0,05 0,78±0,05 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD4+/CD3+CD8+ 2,28±0,13 1,90±0,09 2,04±0,12 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD25+/CD95+ 0,24±0,01 0,29±0,02 0,35±0,02 >0,05 <0,05 >0,05 ИТМЛ, % 27,5±1,0 29,3±1,5 24,1±1,3 >0,05 >0,05 <0,05 Приме чани е. Здесь и в табл. 2, 3: p — статистическая значимость различий больных с контрольной группой после оперативного лечения, p — с контрольной группой на фоне проведения оперативного лечения + СИТ, p — между группами больных в зависимости от лечения, по 2 3 методике Стьюдента или критерию Манна—Уитни, ИТМЛ — индекс торможения миграции лимфоцитов. терлейкин-2). Определяли число общих Т-лимфоцитов и Т-клеток в зависимости от кластеров дифференциров- ки методом иммунофлюоресценции. Определялись следующие кластеры лимфоцитов: CD3+ — зрелые Т-лимфоциты ("Beckman Coulter", № А07746); CD3+CD4+ — Т-хелперы ("Beckman Coul- ter", № А07750); CD3+CD8+ — Т-супрессоры и киллеры ("Beckman Coulter", № А07757); CD3-CD56+CD16+ — естественные киллеры ("Beckman Coulter", № А07735); CD3+CD56+CD16+ — Т-киллеры ("Beckman Coulter", № А07415); CD19+ — В-лимфоциты ("Beckman Coulter", № 6603859); CD4+CD25+ — "юные" CD4+-клетки ("Beckman Coulter", № IM3486U); CD95+ — преапоптотические лейкоциты всех кластеров дифференцировки ("Beckman Coulter", № IM1504). Исследованы следующие соотношения: CD3+CD4+/ CD3+CD8+ — иммунорегуляторный индекс; CD4+CD25+/ CD95+ — индекс активации. Провели статистический анализ. Система обработки данных включала автоматизированную проверку качества подготовки информации (исключение результатов, не относящихся к ряду данных, согласно критерию Романовского), группировку данных по задаваемым критериям. Использованы параметрические и непараметрические методы. Сравнение количественных признаков проводилось с помощью критерия Стьюдента. Ограни- чения использования данного метода включали анализ распределения по критерию Колмогорова—Смирнова, а также критерий равенства дисперсий. При несоблюдении граничных критериев примени- мости параметрических методов использованы непара- метрические методы анализа — в независимых выбор- ках по критерию Манна—Уитни. Результаты и обсуждение В табл. 1 показаны данные о состоянии клеточного звена иммунной системы у больных РШМ IA клиниче- ской стадии после оперативного вмешательства. В послеоперационном периоде отмечался умеренный лейкоцитоз с относительной лимфопенией, хотя абсолют- ное число лимфоцитов было выше, чем до операции. Отме- чалось снижение абсолютного и относительного содержа- ния в крови Т-лимфоцитов, хотя статистически значимые различия были выявлены только с контрольной группой и только по относительному значению показателя. Больший интерес представляло содержание клеток с киллерной функцией. Следует заметить, что этот показатель не имел динамики в послеоперационном периоде, т.е. хирургиче- Т а б лица 2 Особенности показателей клеточного звена иммунитета у больных РШМ IВ стадии при проведении СИТ при комбинированном лечении Лимфоциты общие, ∙ 109/л 2,10±0,09 1,77±0,09 2,18±0,16 1/1 >0,05 2/1 >0,05 3/1 <0,05 CD3+, ∙ 109/л 1,45±0,06 1,15±0,06 1,43±0,10 <0,05 >0,05 <0,05 CD3+CD4+, ∙ 109/л 0,89±0,05 0,77±0,06 0,88±0,08 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD8+, ∙ 109/л 0,39±0,02 0,37±0,02 0,40±0,03 >0,05 >0,05 >0,05 CD3-CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,17±0,01 0,13±0,01 0,14±0,02 <0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,11±0,01 0,07±0,01 0,11±0,01 <0,05 >0,05 <0,05 CD19+, ∙ 109/л 0,24±0,02 0,20±0,01 0,25±0,02 >0,05 >0,05 <0,05 CD3+CD25+, ∙ 109/л 0,21±0,01 0,17±0,01 0,24±0,02 <0,05 >0,05 <0,05 CD95+, ∙ 109/л 0,91±0,07 0,94±0,08 0,81±0,06 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD4+/ CD3+CD8+ 2,28±0,13 2,08±0,12 2,20±0,14 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD25+/CD95+ 0,24±0,01 0,18±0,01 0,30±0,02 <0,05 <0,05 <0,01 ИТМЛ, % 27,5±1,0 35,1±1,5 30,7±1,8 <0,05 >0,05 >0,05 43 РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 3, 2013 Т а б лица 3 Особенности показателей клеточного звена иммунитета у больных РШМ IIA стадии при проведении СИТ при комбинированном лечении 1/1 2/1 3/1 Лимфоциты общие, ∙ 109/л 2,10±0,09 1,81±0,08 1,80±0,14 <0,05 0,05 >0,05 CD3+, ∙ 109/л 1,45±0,06 1,12±0,05 1,26±0,09 <0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD4+, ∙ 109/л 0,89±0,05 0,89±0,05 0,95±0,09 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD8+, ∙ 109/л 0,39±0,02 0,33±0,02 0,30±0,02 <0,05 <0,05 >0,05 CD3-CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,17±0,01 0,12±0,01 0,12±0,02 <0,05 <0,05 >0,05 CD3+CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,11±0,01 0,07±0,01 0,08±0,01 <0,05 <0,05 >0,05 CD19+, ∙ 109/л 0,24±0,02 0,18±0,02 0,21±0,02 <0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD25+, ∙ 109/л 0,21±0,01 0,17±0,01 0,18±0,02 <0,05 >0,05 >0,05 CD95+, ∙ 109/л 0,91±0,07 0,90±0,07 0,98±0,07 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD4+/CD3+CD8+ 2,28±0,13 2,70±0,16 3,17±0,21 0,05 <0,05 >0,05 CD3+CD25+/CD95+ 0,24±0,01 0,19±0,01 0,18±0,01 <0,05 <0,05 >0,05 ИТМЛ, % 27,5±1,0 37,1±1,4 35,2±2,2 <0,01 <0,05 >0,05 ское вмешательство не оказывало негативного влияния на численные показатели клеточного звена, обеспечивающие противоопухолевые механизмы иммунитета. Отмечался рост абсолютного и относительного со- держания CD3+CD25+-клеток. Учитывая характеристики данного клона, мы полагаем, что изменения этого показа- теля были связаны с активацией клеточной регенерации, о чем свидетельствует также статистически значимое повышение среднего соотношения CD3+CD25+/CD95+. Не было выявлено значимых различий в динамике по прочим исследованным показателям клеточного зве- на иммунной системы. Полученные данные позволяют сделать вывод о минимальной степени влияния опера- тивного вмешательства на показатели клеточного звена иммунной системы у больных с ранней стадией РШМ. Данные, характеризующие изменения состояние им- мунной системы после оперативного вмешательства и в ходе проведения дистанционной лучевой терапии при РШМ IВ клинической стадии, показаны в табл. 2. Различия с контрольной группой после оперативно- го лечения и в ходе проведения ДГТ характеризовались главным образом снижением содержания общих лей- коцитов относительно такового в контрольной группе и исходного показателя после лучевой терапии (p <0,01, p <0,05). Также оставалось значимо сниженным содержа- ние лимфоцитов киллерных субпопуляций, не имевшее динамики относительно исходных показателей. Не на- блюдалось также динамики со стороны соотношения CD- клеток, несущих маркеры преапоптотического состояния. Результаты обследования больных РШМ IIA клини- ческой стадии в процессе послеоперационной лучевой терапии представлены в табл. 3. При анализе исследованных показателей было вы- явлено статистически значимое снижение абсолютного числа лейкоцитов в периферической крови на фоне дис- танционной лучевой терапии. Эти изменения являются неизбежными, и нас в большей степени интересовало влияние лечения на численные параметры лимфоцитов и их субпопуляций. В частности, отмечалось уменьшение абсолютного содержания лимфоцитов, Т-лимфоцитов (p <0,01), но степень уменьшения числа CD3+CD4+- и CD3+CD8+-клеток оказалась существенно меньшей (p <0,05), а соотношение относительного содержания этих клеток (иммунорегуляторный индекс) даже имело динамику к росту. Наблюдалось снижение абсолютного, но не относительного, содержания CD3-CD56+CD16+, в то время как содержание Т-киллеров оставалось на том же уровне, что до лечения. Это свидетельствует об отсутствии существенного угнетающего действия комби- нированного лечения в том объеме, который применяется у больных РШМ IIA клинической стадии на показатели клеточных противоопухолевых механизмов. В то же вре- мя снижение исследованных параметров относительно контрольной группы сохранялось и даже усугублялось. Таким образом, в результате проведенного анализа исследованных параметров системы иммунитета у боль- ных РШМ IА, IВ, IIA клинической стадии выявлено, что проведение СИТ обеспечивает наиболее значительную динамику к нормализации показателей клеточного звена иммунной системы в отношении их нарушений, развив- шихся на фоне сочетанной лучевой терапии. Заключение Во всех группах больных РШМ IА, IВ, IIA клиниче- ской стадии были зарегистрированы достоверные разли- чия показателей клеточного иммунитета с контрольной группой, свидетельствующие о снижении морфофунк- циональных показателей Т-лимфоцитов как в послеопе- рационном периоде, так и при комбинированном лече- нии, причем последнее обусловливало гораздо большую степень угнетения иммунной реактивности. Использование СИТ в комплексе лечения способ- ствовало повышению показателей клеточного звена, в первую очередь противоопухолевых механизмов (со- держание естественных киллеров и Т-киллеров). Следу- ет указать на относительно меньшую результативность применения СИТ при комбинированном лечении боль- ных с РШМ IIA стадии.