Specific immunotherapy and cellular immunity in patients with cervical cancer

Abstract

The influence of a combination antineoplastic and immunotherapies on a condition of a cellular immunity in patients with cervical cancer of stage I-IIA is defined. Decrease in indicators of immunity system in the surveyed patients and moderate dynamics of their increase is revealed during the treatment, not being accompanied by adequate restoration of killer cells number.

Full Text

Механизмы клеточного иммунитета являются ключе- выми в структуре иммунологических компонентов про- тивоопухолевой защиты организма. В то же время именно они являются наиболее уязвимыми для воздействия небла- гоприятных факторов, как самого опухолевого роста, так и проводимого противоопухолевого лечения [1—3]. Следует иметь в виду также тот факт, что если им- мунные механизмы не предотвратили развитие пер- вичной опухоли, то не следует ожидать от них полной эффективности и после проведения лечения и любая оставшаяся в организме клетка новообразования мо- жет стать родоначальником нового клона опухолевых клеток — как в исходной зоне локализации рака, так и в виде отдаленного метастаза. Несмотра на то что раннее оперативное и комбини- рованное лечение считается наиболее адекватным для излечения больных с новообразованиями, в зависимо- сти от типа опухоли наблюдается большая или меньшая частота рецидивирования процесса. Предотвращение его — одна из ключевых задач современной онкологии. Известно, что любое оперативное вмешательство, в осо- бенности осуществляемое на фоне первичного иммуно- дефицитного состояния, способствует снижению мор- фофункциональных показателей иммунной системы [4]. Осуществление лучевой терапии у больных раком шейки матки (РШМ) также сопряжено с довольно зна- чительным радиационным воздействием на организм в целом. В первую очередь при этом поражаются имму- нокомпетентые клетки, находящиеся в периферической крови [5]. Значительная длительность процедуры и её многократное повторение в процессе лучевой терапии приводят к облучению значительной части пула цирку- лирующих иммуноцитов [6]. На этом фоне проведение Для корреспонденции: Кенбаева Динара Кумаровна — канд. мед. наук, зав. отд-нием гинекологии; 010009, Республика Казах- стан, г. Астана, ул. Манаса, 16, e-mail: dikenb@mail.ru. специфической иммунотерапии может быть малоэффек- тивным или вообще не давать позитивных результатов в связи с глубоким угнетением защитных механизмов [7]. В настоящее время продолжается разработка мето- дов повышения общей и противоопухолевой активности иммунной системы с целью профилактики постлучевого иммунодефицита и улучшения клинических результатов лечения больных со злокачественными новообразовани- ями различной природы [8, 9]. Одним из позитивных эффектов иммуномодуляции может оказаться потенци- рование результатов специфической иммунотерапии. Цель исследования — определить воздействие спец- ифической иммунотерапии на показатели клеточного звена иммунной системы у больных РШМ. Материал и методы Всего в рамках проведенного клинико-иммунологи- ческого исследования обследованы 88 больных РШМ I—IIA клинической стадии (Т1аN0M0- Т2аN0M0), под- вергавшихся оперативному лечению (I стадия) и ком- бинированному лечению с дистанционной гамма-те- рапией — ДГТ (IIA стадия). Все больные находились в возрасте от 30 до 70 лет. ДГТ в статическом или подвижном режиме прово- дили на область первичной опухоли и зоны возможного параметрального и лимфогенного распространения опу- холи, чередуя с сеансами внутриполостной гамма-тера- пии. Суммарная очаговая доза в точке В от дистанцион- ного облучения составила 40 Гр. Все больные были распределены на 2 группы в зави- симости от проводимой терапии. В 1-ю включены паци- енты, получавшие только оперативное лечение + ДГТ, во 2-ю — больные, получавшие сочетание операция+ДГТ и специфическую иммунотерапию (СИТ) по разработан- ной методике, которая включала инкубацию аутолимфо- цитов с опухолевыми антигенами и стимулятором роста Т-лимфоцитов и хелперным фактором для киллеров (ин- 42 КЛИНИЧЕСКИЕ НАБЛЮДЕНИЯ Т а б лица 1 Особенности показателей клеточного звена иммунитета у больных РШМ IA стадии при проведении СИТ после оперативного вмешательства Лимфоциты общие, ∙ 109/л 2,10±0,09 2,15±0,13 2,36±0,16 1/1 >0,05 2/1 >0,05 3/1 >0,05 CD3+, ∙ 109/л 1,45±0,06 1,27±0,08 1,52±0,10 >0,05 >0,05 <0,05 CD3+CD4+, ∙ 109/л 0,89±0,05 0,76±0,06 0,92±0,08 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD8+, ∙ 109/л 0,39±0,02 0,40±0,03 0,45±0,03 >0,05 >0,05 >0,05 CD3-CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,17±0,01 0,11±0,01 0,16±0,02 <0,05 <0,05 <0,05 CD3+CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,11±0,01 0,09±0,01 0,12±0,01 <0,05 >0,05 <0,05 CD19+, ∙ 109/л 0,24±0,02 0,31±0,02 0,28±0,02 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD25+, ∙ 109/л 0,21±0,01 0,22±0,02 0,27±0,02 <0,05 <0,05 >0,05 CD95+, ∙ 109/л 0,91±0,07 0,75±0,05 0,78±0,05 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD4+/CD3+CD8+ 2,28±0,13 1,90±0,09 2,04±0,12 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD25+/CD95+ 0,24±0,01 0,29±0,02 0,35±0,02 >0,05 <0,05 >0,05 ИТМЛ, % 27,5±1,0 29,3±1,5 24,1±1,3 >0,05 >0,05 <0,05 Приме чани е. Здесь и в табл. 2, 3: p — статистическая значимость различий больных с контрольной группой после оперативного лечения, p — с контрольной группой на фоне проведения оперативного лечения + СИТ, p — между группами больных в зависимости от лечения, по 2 3 методике Стьюдента или критерию Манна—Уитни, ИТМЛ — индекс торможения миграции лимфоцитов. терлейкин-2). Определяли число общих Т-лимфоцитов и Т-клеток в зависимости от кластеров дифференциров- ки методом иммунофлюоресценции. Определялись следующие кластеры лимфоцитов: CD3+ — зрелые Т-лимфоциты ("Beckman Coulter", № А07746); CD3+CD4+ — Т-хелперы ("Beckman Coul- ter", № А07750); CD3+CD8+ — Т-супрессоры и киллеры ("Beckman Coulter", № А07757); CD3-CD56+CD16+ — естественные киллеры ("Beckman Coulter", № А07735); CD3+CD56+CD16+ — Т-киллеры ("Beckman Coulter", № А07415); CD19+ — В-лимфоциты ("Beckman Coulter", № 6603859); CD4+CD25+ — "юные" CD4+-клетки ("Beckman Coulter", № IM3486U); CD95+ — преапоптотические лейкоциты всех кластеров дифференцировки ("Beckman Coulter", № IM1504). Исследованы следующие соотношения: CD3+CD4+/ CD3+CD8+ — иммунорегуляторный индекс; CD4+CD25+/ CD95+ — индекс активации. Провели статистический анализ. Система обработки данных включала автоматизированную проверку качества подготовки информации (исключение результатов, не относящихся к ряду данных, согласно критерию Романовского), группировку данных по задаваемым критериям. Использованы параметрические и непараметрические методы. Сравнение количественных признаков проводилось с помощью критерия Стьюдента. Ограни- чения использования данного метода включали анализ распределения по критерию Колмогорова—Смирнова, а также критерий равенства дисперсий. При несоблюдении граничных критериев примени- мости параметрических методов использованы непара- метрические методы анализа — в независимых выбор- ках по критерию Манна—Уитни. Результаты и обсуждение В табл. 1 показаны данные о состоянии клеточного звена иммунной системы у больных РШМ IA клиниче- ской стадии после оперативного вмешательства. В послеоперационном периоде отмечался умеренный лейкоцитоз с относительной лимфопенией, хотя абсолют- ное число лимфоцитов было выше, чем до операции. Отме- чалось снижение абсолютного и относительного содержа- ния в крови Т-лимфоцитов, хотя статистически значимые различия были выявлены только с контрольной группой и только по относительному значению показателя. Больший интерес представляло содержание клеток с киллерной функцией. Следует заметить, что этот показатель не имел динамики в послеоперационном периоде, т.е. хирургиче- Т а б лица 2 Особенности показателей клеточного звена иммунитета у больных РШМ IВ стадии при проведении СИТ при комбинированном лечении Лимфоциты общие, ∙ 109/л 2,10±0,09 1,77±0,09 2,18±0,16 1/1 >0,05 2/1 >0,05 3/1 <0,05 CD3+, ∙ 109/л 1,45±0,06 1,15±0,06 1,43±0,10 <0,05 >0,05 <0,05 CD3+CD4+, ∙ 109/л 0,89±0,05 0,77±0,06 0,88±0,08 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD8+, ∙ 109/л 0,39±0,02 0,37±0,02 0,40±0,03 >0,05 >0,05 >0,05 CD3-CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,17±0,01 0,13±0,01 0,14±0,02 <0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,11±0,01 0,07±0,01 0,11±0,01 <0,05 >0,05 <0,05 CD19+, ∙ 109/л 0,24±0,02 0,20±0,01 0,25±0,02 >0,05 >0,05 <0,05 CD3+CD25+, ∙ 109/л 0,21±0,01 0,17±0,01 0,24±0,02 <0,05 >0,05 <0,05 CD95+, ∙ 109/л 0,91±0,07 0,94±0,08 0,81±0,06 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD4+/ CD3+CD8+ 2,28±0,13 2,08±0,12 2,20±0,14 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD25+/CD95+ 0,24±0,01 0,18±0,01 0,30±0,02 <0,05 <0,05 <0,01 ИТМЛ, % 27,5±1,0 35,1±1,5 30,7±1,8 <0,05 >0,05 >0,05 43 РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 3, 2013 Т а б лица 3 Особенности показателей клеточного звена иммунитета у больных РШМ IIA стадии при проведении СИТ при комбинированном лечении 1/1 2/1 3/1 Лимфоциты общие, ∙ 109/л 2,10±0,09 1,81±0,08 1,80±0,14 <0,05 0,05 >0,05 CD3+, ∙ 109/л 1,45±0,06 1,12±0,05 1,26±0,09 <0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD4+, ∙ 109/л 0,89±0,05 0,89±0,05 0,95±0,09 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD8+, ∙ 109/л 0,39±0,02 0,33±0,02 0,30±0,02 <0,05 <0,05 >0,05 CD3-CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,17±0,01 0,12±0,01 0,12±0,02 <0,05 <0,05 >0,05 CD3+CD56+CD16+, ∙ 109/л 0,11±0,01 0,07±0,01 0,08±0,01 <0,05 <0,05 >0,05 CD19+, ∙ 109/л 0,24±0,02 0,18±0,02 0,21±0,02 <0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD25+, ∙ 109/л 0,21±0,01 0,17±0,01 0,18±0,02 <0,05 >0,05 >0,05 CD95+, ∙ 109/л 0,91±0,07 0,90±0,07 0,98±0,07 >0,05 >0,05 >0,05 CD3+CD4+/CD3+CD8+ 2,28±0,13 2,70±0,16 3,17±0,21 0,05 <0,05 >0,05 CD3+CD25+/CD95+ 0,24±0,01 0,19±0,01 0,18±0,01 <0,05 <0,05 >0,05 ИТМЛ, % 27,5±1,0 37,1±1,4 35,2±2,2 <0,01 <0,05 >0,05 ское вмешательство не оказывало негативного влияния на численные показатели клеточного звена, обеспечивающие противоопухолевые механизмы иммунитета. Отмечался рост абсолютного и относительного со- держания CD3+CD25+-клеток. Учитывая характеристики данного клона, мы полагаем, что изменения этого показа- теля были связаны с активацией клеточной регенерации, о чем свидетельствует также статистически значимое повышение среднего соотношения CD3+CD25+/CD95+. Не было выявлено значимых различий в динамике по прочим исследованным показателям клеточного зве- на иммунной системы. Полученные данные позволяют сделать вывод о минимальной степени влияния опера- тивного вмешательства на показатели клеточного звена иммунной системы у больных с ранней стадией РШМ. Данные, характеризующие изменения состояние им- мунной системы после оперативного вмешательства и в ходе проведения дистанционной лучевой терапии при РШМ IВ клинической стадии, показаны в табл. 2. Различия с контрольной группой после оперативно- го лечения и в ходе проведения ДГТ характеризовались главным образом снижением содержания общих лей- коцитов относительно такового в контрольной группе и исходного показателя после лучевой терапии (p <0,01, p <0,05). Также оставалось значимо сниженным содержа- ние лимфоцитов киллерных субпопуляций, не имевшее динамики относительно исходных показателей. Не на- блюдалось также динамики со стороны соотношения CD- клеток, несущих маркеры преапоптотического состояния. Результаты обследования больных РШМ IIA клини- ческой стадии в процессе послеоперационной лучевой терапии представлены в табл. 3. При анализе исследованных показателей было вы- явлено статистически значимое снижение абсолютного числа лейкоцитов в периферической крови на фоне дис- танционной лучевой терапии. Эти изменения являются неизбежными, и нас в большей степени интересовало влияние лечения на численные параметры лимфоцитов и их субпопуляций. В частности, отмечалось уменьшение абсолютного содержания лимфоцитов, Т-лимфоцитов (p <0,01), но степень уменьшения числа CD3+CD4+- и CD3+CD8+-клеток оказалась существенно меньшей (p <0,05), а соотношение относительного содержания этих клеток (иммунорегуляторный индекс) даже имело динамику к росту. Наблюдалось снижение абсолютного, но не относительного, содержания CD3-CD56+CD16+, в то время как содержание Т-киллеров оставалось на том же уровне, что до лечения. Это свидетельствует об отсутствии существенного угнетающего действия комби- нированного лечения в том объеме, который применяется у больных РШМ IIA клинической стадии на показатели клеточных противоопухолевых механизмов. В то же вре- мя снижение исследованных параметров относительно контрольной группы сохранялось и даже усугублялось. Таким образом, в результате проведенного анализа исследованных параметров системы иммунитета у боль- ных РШМ IА, IВ, IIA клинической стадии выявлено, что проведение СИТ обеспечивает наиболее значительную динамику к нормализации показателей клеточного звена иммунной системы в отношении их нарушений, развив- шихся на фоне сочетанной лучевой терапии. Заключение Во всех группах больных РШМ IА, IВ, IIA клиниче- ской стадии были зарегистрированы достоверные разли- чия показателей клеточного иммунитета с контрольной группой, свидетельствующие о снижении морфофунк- циональных показателей Т-лимфоцитов как в послеопе- рационном периоде, так и при комбинированном лече- нии, причем последнее обусловливало гораздо большую степень угнетения иммунной реактивности. Использование СИТ в комплексе лечения способ- ствовало повышению показателей клеточного звена, в первую очередь противоопухолевых механизмов (со- держание естественных киллеров и Т-киллеров). Следу- ет указать на относительно меньшую результативность применения СИТ при комбинированном лечении боль- ных с РШМ IIA стадии.