Оценка функциональной активности и специфичности промотора гена hSLPI

Обоснование. Одной из основных проблем современной онкотерапии является отсутствие избирательности действия используемых противоопухолевых препаратов, приводящее к их системной токсичности на организм. Направленная экспрессия терапевтических генов представляет собой новый подход в генотерапии рака. Одним из способов достижения избирательности действия терапевтических генов по отношению к опухолевым клеткам является использование промоторов, которые активны только в опухолевых, но не в нормальных клетках.

Цель — оценить функциональную активность и специфичность промотора ингибитора секреторной лейкоцитарной протеазы человека hSLPI.

Материалы и методы. Промотор гена hSLPI клонировали в беспромоторный вектор pTurboGFP-PRL. Функциональную активность и специфичность промотора оценивали по экспрессии мРНК репортёрного гена TurboGFP и интенсивности его свечения в опухолевых клетках A549, MCF-7, HeLa и нормальных — WI-38 методами полимеразной цепной реакции в реальном времени с обратной транскрипцией и флуоресцентного анализа, соответственно.

Результаты. Несмотря на данные литературы, промотор гена hSLPIa продемонстрировал высокую транскрипционную активность только в отношении опухолевых клеток рака шейки матки HeLa. При этом в клетках аденокарциномы легкого А549 и рака груди MCF-7, как и в нормальных клетках WI-38, наблюдался пониженный уровень активности промотора.

Заключение. Полученные данные подтверждают необходимость проведения предварительной оценки функциональной активности опухоль-специфичных промоторов в отношении опухолевых и нормальных клеток.