The influence of neutrophil elastase inhibitors on mice survival with the pancreatic cancer during experiment

Abstract

Inhibitor neutrophil elastase (ZD0892) increases mice survival with the pancreatic cancer in experiment. This effect amplifies at application of ZD0892 with xelody (antimetabolite, antineoplastic drug, fluoropyrimidine carbamate derivative), which inhibits primary tumor growing in the pancreatic cancer.

Full Text

Одной из проблем рака поджелудочной железы яв- ляются поздняя диагностика и его выявление в запу- щенных стадиях, что отражается на низком проценте радикально пролеченных больных [1]. Все это, а также раннее метастазирование первичной опухоли при отсут- ствии клинических проявлений на начальных стадиях заболевания предрасполагают к плохому прогнозу [2]. Имеются данные, что на развитие злокачественной опу- холи влияют нейтрофилы человека [3, 6]. Нейтрофилы стимулируют развитие рака поджелудочной железы, но чаще всего это действие они оказывают на более позд- них стадиях заболевания [3—5]. Цель исследования — изучить влияние ингибитора эластазы нейтрофилов на выживаемость мышей с раком поджелудочной железы в эксперименте. Для корреспонденции: Фокеев Сергей Дмитриевич — д-р мед. наук, проф. каф. факультетской хирургии им. проф. И.И. Неймарка с курсом хирургии ФПК и ППС; 656038, г. Бар- наул, пр. Ленина, 40, e-mail: fokeev.sergey@yandex.ru. Материал и методы Для определения роли ингибитора эластазы нейтро- филов в прогрессии панкреатической аденокарциномы использовалась специальная модель протоковой адено- карциномы поджелудочной железы — 6606 PDA у мы- шей. В эксперименте использованы 60 животных в воз- расте 8—12 нед массой 20—25 г. Мышам в стерильных условиях проводился наркоз (Pentobarbitalnarkose — 60 мг/кг), они фиксировались (рис. 1), затем выполня- лась срединная лапаротомия, выделялась головка под- желудочной железы (рис. 2) и непосредственно в нее вводили 250 тыс. клеток протоковой аденокарциномы поджелудочной железы — 6606 PDA (рис. 3). После введения опухолевых клеток лапаротомная рана ушивалась. Через 2 нед после инъекции опухоле- вых клеток в головку поджелудочной железы с помо- щью специальной иглы в желудок ежедневно в одной и той же дозе вводились препараты — физиологический раствор, ингибитор эластазы нейтрофилов, кселода и 27 РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 3, 2013 Рис. 1. Фиксация мыши к операционному столу под наркозом. Рис. 2. Срединная лапаротомия, мобилизация головки поджелудочной железы. Рис. 3. Введение в головку поджелу- дочной железы 250 тыс. клеток прото- ковой аденокарциномы поджелудочной их сочетание. У животных ежедневно на протяжении 110 дней исследовалась брюшная полость на предмет пальпаторно определяемой опухоли, а также изучалась их выживаемость. Для оценки эффективности влияния ингибитора эластазы нейтрофилов на выживаемость мышей со злокачественной опухолью поджелудочной железы в эксперименте все животные были разделены на 2 группы (табл. 1). 1-я группа (сравнения) — 15 мышей. В этой группе животным вводили в желудок физиологический раствор (NaCl). 2-я группа (основная) — 45 животных. Она была разделена на 3 подгруппы: подгруппа А — 15 мышей, которым вводили в желудок ZD0892; подгруппа В — 15 животных, которым вводили в желудок кселоду; подгруппа С — 15 мышей, которым вводили в желудок ZD0892 и кселоду. Результаты и обсуждение При изучении выживаемости животных в экспери- менте в группе сравнения к 30-м суткам наблюдения в живых оставалось 80% мышей, что меньше на 15,6%, чем в основной группе, — 95,6% (p>0,1). Статистически значимые различия появлялись к 60-м суткам наблюде- ния: в группе сравнения выживаемость отмечена у 33,3% мышей, что меньше на 24,5%, чем в основной группе, — у 57,8% (p < 0,05), и эта тенденция сохранялась к 90-м суткам наблюдения — в группе сравнения она была у 6,7% экспериментальных животных, что было меньше на 22,2%, чем в основной группе, — у 28,9% (p < 0,05), железы (6606 PDA). ше на 40%, чем в группе сравнения, — 33,3% (p < 0,05; различия статистически значимы), и больше на 33,3%, чем в подгруппе В, — 40% (p>0,05) и на 13,3%, чем в под- группе С, — 60% (p>0,25). Выживаемость к 90-м суткам наблюдения за животными была в подгруппе А 33,3%, что больше на 26,6%, чем в группе сравнения, — 6,7% (p>0,05) и на 20%, чем в подгруппе В, — 13,3% (p>0,1), но меньше на 6,7%, чем в подгруппе С, — 40% (p>0,5). В подгруппе В выживаемость к 30-м суткам наблю- дения составляла 86,7%, что было больше на 6,7%, чем в группе сравнения, — 80% (p>0,5), но меньше на 13,3%, чем в подгруппах А и С, где выживаемость составляла 100% (p>0,1). К 60-м суткам выживаемость в подгруп- пе В была 40%, что было больше на 6,7%, чем в группе сравнения, — 33,3% (p>0,2), но меньше на 33,3%, чем в подгруппе А, — 73,3% (p>0,05) и на 20%, чем в под- группе С, — 60% (p>0,25). К 90-м суткам наблюдения за экспериментальными животными выживаемость в под- группе В составляла 13,3%, что больше на 6,6% (p>0,5), чем в группе сравнения, но меньше на 20%, чем в под- группе А, — 33,3% (p>0,1) и на 26,7%, чем в подгруппе С, — 40% (p>0,05). Выживаемость в подгруппе С к 30-м суткам наблю- дения была 100%, что больше на 20%, чем в группе сравнения, — 80% (p>0,05), к 60-м суткам она соответ- ствовала 60%, что больше, чем в группе сравнения, на 26,7%, и составляла 33,3% (p>0,1), к 90-м суткам выжи- Т а б лица 1 Характеристика групп экспериментальных животных Число животных в завик 110-м суткам наблюдения выживаемость была только в основной группе — у 2,2% мышей. Интерес представляет выживаемость эксперимен- Группа животных симости от проводимого лечения Вводимые per os препараты тальных животных в основной группе в зависимости от того, какие препараты они получали. В подгруппе А к 30-м суткам наблюдения выживае- мость имела место у 100% мышей, что больше на 20%, чем в группе сравнения, — у 80% (p>0,05). Различия име- ли место с подгруппой В, выживаемость в которой была на 13,3% меньше, чем в подгруппе А, и составляла 86,7% (p>0,1), статистических различий выживаемости между подгруппами А и С не наблюдалось. К 60-м суткам выжи- 1-я (сравнения) 15 0,9% NaCl 2-я (основная): 45 в том числе в подгруппах: А 15 ZD0892 В 15 Кселода С 15 ZD0892 и кселода Вс ег о ... 60 ваемость в подгруппе А составляла 73,3%, что было боль- 28 КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Выживаемость животных в группах эксперимента Т а б лица 2 К 30-м суткам наблюдения за выжив- шими экспериментальными животными в основной группе, в подгруппе А, опу- холь в брюшной полости определялась у 33,3% мышей, что было сопоставимо с группой сравнения — у 33,3%, но было 1-2 p >0,05 <0,05 >0,05 подгруппа В 15 13 86,7 6 40 2 13,3 — — p >0,1 >0,05 >0,1 подгруппа C 15 15 100 9 60 6 40 1 6,7 p >0,05 >0,1 <0,05 p >0,5 >0,25 >0,5 p >0,1 >0,25 >0,05 B-C Вс ег о ... 60 55 91,7 31 51,7 14 23,3 1 1,7 (p <0,05), различие статистически знаной полости в подгруппе А выявлена у 36,3% экспериментальных мышей, что было меньше на 23,7%, чем в группе чем в подгруппе В, — у 33,3% (p>0,25), но значительно больше на 25,2%, чем в подгруппе С, — у 11,1% мышей (p>0,1). К 90-м суткам наблюдения в подгруп- пе А опухоль в брюшной полости была выявлена у 60% мышей, что меньше на 40%, чем в группе сравнения, — у 100% (p>0,05), что аналогично с подгруппой В — у 100% (p>0,25) мышей, но значиваемость в подгруппе С составляла 40%, что оказалось больше на 33,3%, чем в группе сравнения, — 6,7% (p < 0,05), различия статистически значимы. К 110-м суткам выживаемость наблюдалась только в подгруппе С и со- ставляла 6,7% (табл.2). При исследовании брюшной полости выживших экс- периментальных животных на предмет определяемой опухоли к 30-м суткам она пальпировалась в группе сравнения у 33,3% мышей, что было больше на 12,4%, чем в основной группе, — у 20,9% (p>0,25). Эта тен- денция усиливалась к 60-м суткам наблюдения; так, в группе сравнения она определялась у 60%, что было больше на 33,1%, чем в основной группе, — у 26,9% мы- шей (p>0,1). К 90-м суткам у 100% экспериментальных животных определялась опухоль в брюшной полости, что было больше на 53,8%, чем в группе сравнения, — у 46,2% (p <0,002), различия статистически значимы. тельно больше на 43,3%, чем в подгруппе С, — у 16,7% выживших мышей. В подгруппе В к 30-м суткам опу- холь в брюшной полости выявлялась у 30,8% мышей, что было меньше на 2,5%, чем в группе сравнения, — у 33,3% (p>0,5), но больше на 30,8%, чем в подгруппе С, — 0% (p <0,05), различия статистически значимы. К 60-м суткам опухоль определяли у 33,3% экспериментальных мышей, что было меньше на 26,7%, чем в группе сравнения, — у 60%, но больше на 25,5%, чем в подгруппе С, — у 11,1% (p>0,25). К 90-м суткам наблюдения опухоль в брюшной полости определялась в подгруппе В — у 100% мышей, что было идентично группе сравнения, но больше на 40%, чем в подгруппе А, — у 60% экспериментальных животных (p>0,25) и на 83,3%, чем в подгруппе С, — у 16,7% мышей (p <0,001), различия статистически значимы. В подгруппе С к 30-м суткам опухоль в брюшной полости у экспериментальных мы- Частота пальпаторно определяемой опухоли в брюшной полости среди выживших животных Т а б лица 3 Группа и подгруппы животных Процент пальпаторно определяемой опухоли у мышей относительно выживших к этому сроку на этапах наблюдения, сут Группа и подгруппы животных до 30 к 60-м к 90-м к 110-м Группа и подгруппы животных выжили абс. % выжили абс. % выжили абс. % выжили абс. % 1-2 >0,25 >0,1 <0,002 подгруппа А 15 5 33,3 11 4 36,3 5 3 60 — — — 1-А >0,5 <0,25 >0,05 подгруппа В 13 4 30,8 6 2 33,3 2 2 100 — — — 1-В А-В >0,5 >0,25 >0,5 >0,5 >0,5 >0,25 подгруппа С 15 — — 9 1 11,1 6 1 16,7 1 — — 1-С <0,05 >0,05 <0,001 А-С p <0,05 >0,1 >0,1 <0,05 >0,25 <0,001 В-С Вс ег о ... 55 13 23,6 31 10 32,2 14 7 50 1 — — 29 РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 3, 2013 шей не определялась, но в группе сравнения она выявле- на у 33,3% (p <0,05), различия статистически значимы; к 60-м суткам опухоль в брюшной полости выявлена у 11,1% мышей, что было меньше на 48,9%, чем в группе сравнения, — у 60% (p>0,05); к 90-м суткам это разли- чие достигало 83,3%, в группе сравнения в этот период опухоль пальпировалась у выживших животных в 100% (p <0,001), различия статистически значимы (табл. 3). Таким образом, сочетание ингибитора эластазы нейтрофилов совместно с химиопрепаратом кселодой способно повышать выживаемость мышей с привитой протоковой аденокарциномой поджелудочной желе- зы — 6606 PDA и замедлять рост первичной опухоли в брюшной полости у мышей в эксперименте.