THE BRAF MUTATION V600E IN PAPILLARY THYROID CANCER, CLINICAL-MORPHOLOGICALPARALLELES AND PROGNOSIS



Cite item

Full Text

Abstract

On the material of the 67 cases of papillary thyroid cancer (PTC) authors executed the study of the interrelationship between the BRAF mutation V600E and the forecast, biomolecular and morphological characteristics of the disease. There was implemented the analysis of samples for the presence of 7 KRAS gene mutations, 4 mutations of the PIK3CA gene, mutation BRAF V600E with the revealing of the interrelationship between such biomolecular markers for proliferation and apoptosis as Ki-67, p53, Bcl2. Also there was performed chromogenic hybridization (CISH method) in situ to study the status of the HER2 gene. There was determined the interrelationship between BRAF mutation V600E and clinical indices of prognosis: tumor sizes, capsule invasion, presence of metastases in regional lymph nodes. In addition, there was evaluated the interrelationship between BRAF mutation V600E and 10-years survival rate. No mutation were identified in KRAS, PI3K genes. BRAF mutation V600E was identified in 50 cases (75%). The frequency of V600E in women accounted of 75 ± 6.4%, in men - 67 ± 27.1%. In patients with the presence of V600E the size of a node was slightly less than in the absence of mutations and in 76% of cases did not reach the average value of 1.8 cm. Invasion into the capsule was identified in 35 ± 12.7% cases with a positive BRAF mutation V600E status and in 56 ± 8.4% - in cases with a negative status. Metastases in regional lymph nodes occurred in 36 ± 11.6% in patients with V600E and in 47 ± 18.9% of cases without this mutation. There was obtained the interrelationship between V600E and Ki-67: the average level of the proliferative activity in the presence of the given mutation was 4.4 ± 0.6%, in the absence - 9.4 ± 3.9%. No interrelationship was obtained between V600E and other biomolecular parameters or this interrelationship was tendentious in character. In terms of 10-years survival the groups with or without V600E statistically did not differ. Based on the data, it was possible to say about the absence of the negative impact of V600E on the prognosis in PTC patients

Full Text

Локачественные опухоли щитовидной железы составляют 1-2% в общей структуре онкологической заболеваемости [1], а встречаемость данной патологии среди болезней органов эндокринной системы достигает 90% [2]. К причинам роста заболеваемости раком щитовидной железы (РЩЖ) относят не только улучшение качества диагностики, но и воздействие экзогенных факторов [3, 4]. С точки зрения гистологических форм среди рака щитовидной железы у взрослых преобладают дифференцированные формы, подавляющее большинство которых составляет папиллярный рак. В Алтайском крае папиллярный рак щитовидной железы (ПРЩЖ) также является ведущим морфологическим вариантом РЩЖ, и его частота равняется 71% от числа всех диагностированных раковых опухолей ЩЖ [5]. ПРЩЖ имеет относительно благоприятное течение, но существуют редкие случаи, для которых характерно более агрессивное клиническое течение. Это обусловливает необходимость внедрения эффективных методов диагностики и рационального использования новых методов лечения. По данным различных авторов, при папиллярном раке щитовидной железы наиболее часто встречается мутация гена BRAF, выявляются мутации в генах PIK3CA, KRAS, HRAS, NRAS, а также RET/PTC и TRK-перестройки [6-8]. Мутация V600E в гене BRAF обнаруживается при папиллярном раке щитовидной железы в широком диапазоне - в 29-83% случаев, по данным разных авторов [9, 10]. Такой большой разброс частоты встречаемости мутации BRAF V600E может быть связан не только с географическим расположением, но и с применением различных по чувствительности методов исследования, а также с неоднородностью состава групп пациентов с разными вариантами папиллярного рака щитовидной железы. По данным ряда авторов, наличие мутации BRAF V600E является неблагоприятным прогностическим критерием, однако данное мнение разделяют не все исследователи [11-20]. Связь мутации BRAF V600E с прогностически неблагоприятными критериями, такими как инвазия в капсулу и наличие метастазов в региональных лимфоузлах, продолжает оставаться одним из важных вопросов. В настоящее время недостаточно изучена взаимосвязь BRAF V600E с прогностическими критериями и с биомолекулярными характеристиками опухолевых клеток, определяющими пролиферативную активность клеток и апоптоз, что является одним из важных факторов для фундаментального обоснования клинического течения заболевания и более глубокого понимания прогностической роли мутации при ПРЩЖ. Такими характеристиками в настоящее время являются хорошо зарекомендовавшие себя белки - маркеры пролиферативной активности Ki-67, а также Bcl-2, р53, отражающие состояние апоптоза (супрессия и активация) [21-23]. Гибридизация позволяет объективно определить статус гена HER2, который, как уже доказано, задействован в каскаде опухолевой прогрессии при злокачественных новообразованиях ряда локализаций [24]. Цель исследования - определение частоты клинически значимых мутаций в генах BRAF, KRAS и PIK3CA во взаимосвязи данных генетических повреждений с клинико-патологическими и биомолекулярными характеристиками папиллярного рака щитовидной железы. Материал и методы В исследование включены 67 пациентов с ПРЩЖ с известным прогнозом за период 2005-2015 гг., пролеченных в Алтайском краевом онкологическом диспансере и перенесших операцию по поводу ПРЩЖ в 2005-2009 гг. Средний возраст больных составил 48 лет, из них мужчин было 9%, женщин - 91%. Инвазия в капсулу отмечена у 40% пациентов. Метастазы в регионарных лимфоузлах выявлены в 39% случаев. За данный период были прооперированы 888 человек, из них умерли по причине прогрессирования ПРЩЖ 14 пациентов, 9 из которых были включены в анализ. Материалом для исследования послужил операционный материал, фиксированный в 10% нейтральном забуференном формалине в течение 6- 24 ч и заключенный в парафин. Ткань, из которой выделяли ДНК, верифицировалась патоморфологом, проводилась оценка характера опухоли, количества опухолевой ткани в материале, при необходимости выполнялась микродиссекция нужного фрагмента. Выделение ДНК из ткани производили с помощью набора FFPE QIAGEN по протоколу производителя на автоматической станции для выделения нуклеиновых кислот и белков QIAcube (QIAGEN). Мутация p. Val600Glu(V600E) c.1799T>A [COSMIC ID 475] 15-го экзона гена BRAF определялась с помощью аллель-специфичной ПЦР в реальном времени набором Real-time - PCR-BRAF-V600E («Биолинк»). Мутации p. Gly12Cys (G12C) c.34G>T [COSMIC ID 516], p. Gly12Ser (G12S) c.34G>A [COSMIC ID 517], p. Gly12Arg (G12R) c.34G>C [COSMIC ID 518], p. Gly12Val (G12V) c.35G>T [COSMIC ID 520], p. Gly12Asp (G12D) c.35G>A [COSMIC ID 521], p. Gly12Ala (G12A) c.35G>C [COSMIC ID 522], p. Gly13Asp (G13D) c.38 G>A [COSMIC ID 532] в 12-м и 13-м кодонах 2-го экзона гена KRAS выявлялись с помощью аллель-специфичной ПЦР в реальном времени набором Real-time - PCR-KRAS-7M («Биолинк»). Мутации p. His1047Arg (H1047R) c.3140A> G [COSMIC ID 775], p. Glu542Lys (E542K) c.1624G>A[COSMIC ID 760], p. Glu545Asp (E545D) c.1635G> T [COSMIC ID 765], p. Glu545Lys (E545K) c.1633G> A [COSMIC ID 763] в 9-м и 20-м экзонах гена PIK3CA определяли с помощью аллель-специ-фичной ПЦР в реальном времени набором PIK3CA Mutation Test Kit (QIAGEN). Реакции и анализ результатов проводили на аппарате SFX-96 («Bio-Rad», США) по протоколам производителей реактивов. Также использовали иммуногистохимическое исследование с антителами Ki-67 (клон MIB1, «DAKO»), p53 (клон DO-7, «Ventana»), Bcl-2 (клон 124, «Ventana») и хромогенную гибридизацию in situ (методом CISH) на стейнере Ventana XT по стандартным протоколам. Для стандартизации исследования использовался метод тканевых матриц. При проведении окраски материала изготовляли срезы толщиной 4 мкр. Для определения статуса гена HER2 методом CISH использовали набор ДНК-зондов INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail, «Ventana». Процедуру окраски ISH и идентификацию результатов производили по рекомендованным протоколам производителя. В диагностике биомолекулярных параметров использовали пороговые величины, представляющие собой средние арифметические показатели маркера. Анализ выживаемости оценивали актуриальным методом Каплана-Мейера, многофакторный анализ проводили по Коксу, с определением ряда статистических предикторов для многофакторных и моновариантных систем просчета с уровнем безошибочного суждения 95% для непараметрических систем анализа. Различия считались статистически достоверными при значениях p ≤ 0,05 и t ≥ 2. Для статистической обработки данных использовали программу Statistica 8.0. Результаты и обсуждение Мутации генов KRAS (p. Gly12Cys, p. Gly12Ser, p. Gly12Arg, p. Gly12Val, p. Gly12Asp, p. Gly12Ala, p. Gly13Asp), PIK3CA (p. His1047Arg, p. Glu542Lys, p. Glu545Asp, p. Glu545Lys) не выявлены ни в одном случае ПРЩЖ. Мутация p. Val600Glu в гене BRAF выявлена в 50 (75%) случаях. При анализе взаимосвязи мутации V600E гена BRAF с возрастно-половыми характеристиками выявлено, что частота обнаружения данной мутации у женщин составила 75 ± 6,4%, а у мужчин - 67 ± 27,1% соответственно. Нами не обнаружено никакой взаимосвязи между полом и наличием мутации BRAF V600E (табл. 1), что соответствует данным публикаций X. Lee и соавт. [25] и D. Ahn и соавт. [16]. Вместе с тем, по данным некоторых исследователей (S. Kim et al., 2012; X. Xu et al., 2003), мутация BRAF V600E чаще обнаруживалась у мужчин [26, 27]. Средний возраст BRAF-позитивных пациентов составил 49 ± 1,8 года, а BRAF-негативных пациентов - 45 ± 4,2 года (см. табл. 1). В исследовании E. Kebebew и соавт. мутация BRAF V600E чаще выявлялась в старших возрастных группах [11]. Однако S. Kim и соавт. (2012) и X. Lee и соавт. (2009) не выявили взаимосвязи между возрастом и мутацией BRAF V600E [25, 26]. При анализе взаимосвязи мутации BRAF V600E с размером опухоли выявлено, что у пациентов с наличием данной мутации размер узла несколько меньше, чем при отсутствии мутации, и в 76% случаев не достигал средней величины 1,8 см. Средние размеры узла при наличии мутации BRAF V600E составили 1,4 ± 0,1 см против 3 ± 0,8 см при отсутствии данной мутации, различия статистически значимы (см. табл. 1). Полученные результаты противоречат данным в публикации S. Kim и соавт. (2012), где описана связь между наличием мутации BRAF V600E и большим размером опухоли [26]. В работе D. Ahn и соавт. (2012) исследователи не смогли выявить закономерности между наличием данной мутации и размером узла [16]. Инвазию в капсулу мы выявляли в 35 ± 12,7% случаев с положительным статусом V600E и в 56 ± 8,4% случаев с отрицательным статусом V600E - различия статистически недостоверны (см. табл. 1). В исследованиях X. Lee и соавт. [25] и S. Kim и соавт. [26] получены противоположные результаты, показывающие более частую инвазию в капсулу у пациентов с наличием мутации BRAF V600E. Метастазы в регионарных лимфоузлах в нашем исследовании встречались у 36 ± 11,6% пациентов с наличием мутации V600E и у 47 ± 18,9% - с отсутствием данной мутации (см. табл. 1). Полученные нами результаты отличны от результатов E. Kebebew и соавт. [11] и X. Lee и соавт. [25], по данным которых метастазы в лимфатических узлах встречались чаще у больных с мутацией BRAF V600E, однако наши данные сопоставимы с результатами исследований других авторов - D. Ahn и соавт. [16] и S. Kim и соавт. [26], в которых частота метастазов существенно не отличалась в группах пациентов с диким и мутантным типом данного гена. Анализ взаимосвязи уровня индекса Ki-67 с наличием мутации V600E показал, что в опухолях с положительным статусом мутации BRAF V600E пролиферативная активность была несколько ниже и составила 4,4 ± 0,6%, а в опухолях с отрицательным статусом мутации V600E пролиферативная активность была выше и составила 9,4 ± 3,9%. Отличия были статистически незначимы, но зависимость имела тенденционный характер (табл. 2; рис. 1, см. 3-ю полосу обложки). В случаях с мутантным типом гена BRAF число больных с допороговым показателем уровня пролиферативной активности до 5,4% составило 81 ± 7,2%, а при диком типе гена BRAF - 44 ± 28,7%. Однако в связи с малой выборкой при отрицательном статусе V600Е снижение пролиферативной активности при наличии данной мутации носило характер тенденции (см. табл. 2). Полученные нами данные не совпадают с результатами исследования F. Grabellus и соавт. [28], где наблюдалась тенденция к более высокому уровню экспрессии Ki-67 в группе опухолей с наличием мутации BRAF V600E. Анализ взаимосвязи уровня индекса p53 с наличием мутации V600E показал, что в опухолях с положительным статусом мутации BRAF V600E индекс p53 был несколько ниже и составил 1,8 ± 0,4%, а с отрицательным статусом мутации V600E индекс p53 составил 2,8 ± 1,7% (см. табл. 2; рис. 2, см. 3-ю полосу обложки). В случаях с положительном статусом V600E образцы с допороговым показателем экспресии p53 составили 64 ± 9,1%, при отрицательном статусе V600Е - 69 ± 16,4%. Однако в связи с малой выборкой образцов с отрицательным статусом V600Е снижение индекса p53 при наличии мутации носило также тенденционный характер (см. табл. 2). При положительном статусе V600E случаев с преобладанием негативного пула клеток по уровню Bcl-2 выявлено 42 ± 11,3%, при отрицательном статусе V600E - 47 ± 20,4% (см. табл. 2). Амплификации гена HER2 не обнаружено ни в одном случае, но при наличии мутации V600E копийность гена HER2 несколько выше, чем при отсутствии мутации, - 1,98 ± 0,1 против 1,88 ± 0,2 соответственно (см. табл. 2). Общая 10-летняя выживаемость больных ПРЩЖ в нашей выборке составила 85,3 ± 4,3%. При анализе 10-летней выживаемости больных ПРЩЖ в зависимости от статуса гена BRAF получены интересные данные. Так, в группе с наличием мутации V600E 10-летняя выживаемость составила 83,4 ± 15,2% и практически не отличалась от 10-летней выживаемости в группе с отсутствием данной мутации (88,2 ± 32,3%; различия статистически недостоверны) (табл. 3; рис. 3). Стоит отметить, что данный показатель обусловлен абсолютно одинаковой пропорциональной частотой неблагоприятного исхода как в группе с наличием мутации BRAF V600E, так и без нее - 12% больных в этих группах погибали в течение 10 лет, что доказывает отсутствие зависимости прогноза от статуса гена BRAF V600E. Аналогичные данные, показывающие отсутствие взаимосвязи BRAF V600E и отрицательного прогноза, получены в исследованиях D. Ahn и соавт. [16], Е. Puxeddy и соавт. [17], R. Liu и соавт. [18], Y. Ito и соавт. [19], D. Barbaro и соавт. [20], однако в работах E. Kebebew и соавт. [11], M. Nikiforova и соавт. [12], M. Xing и соавт. [13], C. Lupi и соавт. [14], F. Basolo и соавт. [15] получены противоположные результаты. При анализе корреляции мутации BRAF V600E c различными параметрами выявлена слабая зависимость между статусом гена BRAF и индексом Ki-67, а также размером узла, но абсолютно не выявлено корреляции с полом, возрастом, инвазией в капсулу, метастазами в региональных лимфоузлах, индексом p53, экспрессией Bcl-2, амплификацией Her2 (табл. 4). Заключение Частота мутации p. Val600Glu (V600E) гена BRAF при ПРЩЖ в Алтайском крае составила 75%. Мутации KRAS (p. Gly12Cys, p. Gly12Ser, p. Gly12Arg, p. Gly12Val, p. Gly12Asp, p. Gly12Ala, p. Gly13Asp), PIK3CA (p. His1047Arg, p. Glu542Lys, p. Glu545Asp, p. Glu545Lys) не выявлены. Найдена зависимость мутации V600E гена BRAF с индексом пролиферативной активности и максимальным размером узла. Установлено, что мутация BRAF V600E не является неблагоприятным прогностическим критерием при ПРЩЖ.
×

About the authors

A. A Ivanov

Altaysky branch of the N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center

Email: Anatolij0199@yandex.ru
Barnaul, 656049, Russian Federation

A. M Avdalyan

Altaysky branch of the N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center

Barnaul, 656049, Russian Federation

V. J Gerval’d

Altaysky branch of the N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center; Altai State Medical University

Barnaul, 656049, Russian Federation; Barnaul, 656038, Russian Federation

E. L Lushnikova

Institute of Molecular Pathology and Pathomorphology

Novosibirsk, 630117, Russian Federation

Yu. N Zorkina

Altai Oncological Center

Barnaul, 656043, Russian Federation

N. M Kruglova

Altaysky branch of the N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center

Barnaul, 656049, Russian Federation

A. F Lazarev

Altaysky branch of the N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center

Barnaul, 656049, Russian Federation

References

  1. Румянцев П.О., Ильин А.А., Румянцева У.В., Саенко В.А. Рак щитовидной железы: Современные подходы к диагностике и лечению. М.: ГЭОТАР-Медия; 2009: 24.
  2. Гервальд В.Я., Климачев В.В., Авдалян А.М., Иванов А.А., Бобров И.П., Лепилов А.В. и др. Рак щитовидной железы и методы его иммуногистохимической диагностики. Фундаментальные исследования.2014; 10(10): 1911-2.
  3. Chen A.Y., Jemal A., Ward E.M. Increasing incidence of differentiated thyroidcancer in the United States, 1988-2005. Cancer. 2009; 115(16): 3801-7.
  4. Vergamini L.B., Frazier A.L., Abrantes F.L., Ribeiro K.B., Rodriguez-Galindo C. Increase in the incidence of differentiated thyroid carcinoma in children, adolescents, and young adults: a population-based study. J. Pediatr. 2014; 164(6): 1481-85.
  5. Гервальд В.Я., Климачев В.В., Иванов А.А., Рагулина В.Д., Авдалян А.М., Бобров И.П. и др. Рак щитовидной железы. Международный научно-исследовательский журнал. 2014; 8(27): 17-8.
  6. Abubaker J., Jehan Z., Bavi P., Sultana M., Al-Harbi S., Ibrahim M. et al. Clinicopathological analysis of papillary thyroid cancer with PIK3CA alterations in a Middle Eastern population. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2008; 93: 611-8.
  7. Trovisco V., Soares P., Preto A., Castro P., Maximo V., Sobrinho-Simoe M. Molecular genetics of papillary thyroid carcinoma - great expectations. Arq. Bras. Endocrinol. Metab. 2007; 51(5): 643-53.
  8. Costa A.M., Herrero A., Fresno M.F., Heymann J., Alvarez J.A., Cameselle-Teijeiro J. et al. BRAF mutation associated with other genetic events identifies a subset of aggressive papillary thyroid carcinoma. Clin. Endocrinol. (Oxf.). 2008; 68: 618-34.
  9. Choi S., Park H., Kang M., Lee D., Lee K., Lee H. et al. The relationship between the BRAF V600E mutation in papillary thyroid microcarcinoma and clinicopathologic factors. World J. Surg. Oncol. 2013; 11: 291.
  10. Trovisco V., Soares P., Sobrinho-Simoes M. B-RAF mutations in the etiopathogenesis, diagnosis, and prognosis of thyroid carcinomas. Hum. Pathol. 2006; 37: 781-6.
  11. Kebebew E., Weng J., Bauer J., Ranvier G., Clark O.H., Duh Q.Y. et al. The prevalence and prognostic value of BRAF mutation in thyroid cancer. Ann. Surg. 2007; 246: 466-470.
  12. Nikiforova M., Kimura E., Gandhi M., Biddinger P., Knauf J., Basolo F. et al. BRAF mutations in thyroid tumors are restricted to papillary carcinomas and anaplastic or poorly differentiated carcinomas arising from papillary carcinomas. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2003; 88(11): 5399-404.
  13. Xing M., Westra W., Tufano R., Cohen Y., Rosenbaum E., Rhoden K. et al. BRAF mutation predicts a poorer clinical prognosis for papillary thyroid cancer. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2005; 90(12): 6373-79.
  14. Lupi C., Giannini R., Ugolini C., Proietti A., Berti P., Minuto M. et al. Extensive clinical experience. Association of BRAF V600E mutation with poor clinicopathological outcomes in 500 consecutive cases of papillary thyroid carcinoma. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2007; 92(11): 4085-90.
  15. Basolo F., Torregrossa L., Giannini R., Miccoli M., Lupi C., Sensi E. et al. Correlation between the BRAF V600E mutation and tumor invasiveness in papillary thyroid carcinomas smaller than 20 millimeters: Analysis of 1060 cases. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2010; 95(9): 4197-205.
  16. Ahn D., Park J.S., Sohn J.H., Kim J.H., Park S.K., Seo A.N. et al. BRAF V600E mutation does not serve as a prognostic factor in Korean patients with papillary thyroid carcinoma. Auris. Nasus Larynx.2012; 39: 198-203.
  17. Puxeddy E., Moretti S., Elisei R., Romei C., Pascucci R., Martinelli M. BRAF V599E mutation is the leading genetic event in adult sporadic papillary thyroid carcinomas. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2004; 89(5): 2414-20.
  18. Liu R., Chen Y., Chou F., Li C., Wu W., Tsai P. et al. No correlation between BRAF V600E mutation and clinicopathological features of papillary thyroid carcinomas in Taiwan. Clin. Endocrinol. 2005; 63: 461-66.
  19. Ito Y., Miyauchi A. Prognostic factors of papillary and follicular carcinomas in Japan based on data of Kuma hospital. J. Thyroid Res. 2012; Article ID 973497.
  20. Barbaro D., Incensati R.M., Materazzi G., Boni G., Grosso M., Panicucci E. et al. The BRAF V600E mutation in papillary thyroid cancer with positive or suspected pre-surgical cytological finding is not associated with advanced stages or worse prognosis. Endocrine. 2014; 45(3): 462-8.
  21. Scholzen T., Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown. J. Cell. Physiol. 2000; 182(3): 311-22.
  22. McDonnell T.J., Beham A., Sarkiss M., Anderson M.M., Lo P. Importance of the Bcl-2 family in cell death regulation.Experientia. 1996; 52: 1008-17.
  23. Surget S., Khoury M., Bourdon J. Uncovering the role of p53 splice variants in human malignancy: a clinical perspective. OncoTargets and Ther. 2014; 7: 57-68.
  24. Ménard S., Casalini P., Campiglio M., Pupa S.M., Tagliabue E. Role of HER2/neu in tumor progression and therapy. Cell. Mol. Life Sci. 2004; 61: 2965-78.
  25. Lee X., Gao M., Ji Y., Yu Y., Feng Y., Li Y. et al. Analysis of differential BRAF (V600E) mutational status in high aggressive papillary thyroid microcarcinoma. Ann. Surg. Oncol. 2009; 16: 240-5.
  26. Kim S.J., Lee K.E., Myong J.P., Park J.H., Jeon Y.K., Min H.S. et al. BRAF V600E mutation is associated with tumor aggressiveness in papillary thyroid cancer. World J. Surg. 2012; 36: 310-7.
  27. Xu X., Quiros R.M., Gattuso P., Ain K.B., Prinz R.A. High prevalence of BRAF gene mutation in papillary thyroid carcinomas and thyroid tumor cell lines. Cancer Res. 2003; 63: 4561-7.
  28. Grabellus F., Worm K., Schmid K.W., Sheu S.Y. The BRAF V600E mutation in papillary thyroid carcinoma is associated with glucose transporter 1 overexpression. Thyroid. 2012; 22(4): 377-82.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download

Copyright (c) 2017 Eco-Vector


СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ПИ № ФС 77 - 86496 от 11.12.2023 г. 
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: ЭЛ № ФС 77 - 80673 от 23.03.2021 г.


This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies