ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОКОНЪЮГАТОВ НА ОСНОВЕ РОДАМИНА В

Обоснование. Иммуноконъюгаты на основе моноклональных антител (МКАТ) обладают высоким потенциалом в иммунотерапии рака, однако на данный момент остается нерешенной проблема разработки эффективных методов их получения, особенно в случае, когда низкомолекулярный агент не имеет химических групп для присоединения к МКАТ. Данное исследование направлено на синтез иммуноконъюгатов на основе модельного вещества - Родамина В (Rod):, которое не имеет активных химических групп для взаимодействия с химическими группами МКАТ. Для этого был проведен синтез двух производных Rod: родамин-пиперазина (Rod-пиперазин) и его комплекса с бифункциональным агентом SMCC (Rod-SMCC) и последующий синтез иммуноконъюгатов на их основе.

Цель исследования явился анализ функциональных свойств иммуноконъюгатов, полученных на основе модифицированной молекулы родамина В и ряда МКАТ.

Методы. Конъюгирование МКАТ c Rod-SMCC проводилось по восстановленным дисульфидным группам иммуноглобулина G (IgG). Rod-пиперазин присоединяли к окисленным олигосахаридам IgG. Оценку проведенного синтеза проводили спектрофотометрическими методами. Активность полученных конъюгатов осуществляли с помощью ИФА. Молекулярную гетерогенность полученных конъюгатов анализировали высокоэффективной хроматографией.

Результаты. Использование Rod-SMCC позволило получить иммуноконъюгаты по тиоловым группам с 4 исследованными антителами с максимальным насыщением для каждого антитела. Максимальное включение, около 11,5 молей Rod на моль IgG, было получено для МКАТ ICO 204, около 5,5 - для Трастузумаба. Полученные иммуноконъюгаты ICO 204 сохраняли антигенсвязывающую активность сопоставимую с нативными антителами. Использование Rod-пиперазина позволило получить иммуноконъюгаты с МКАТ ICO 204 и Трастузумабом по окисленным углеводным остаткам антител. Максимальная плотность включения Родамина В в эти соединения не превышала 3-х молей на моль IgG, что, по-видимому, связано со значительными стерическими ограничениями реакции.

Заключение. В рамках выполнения работы осуществлен химический синтез двух производных Rod, изначально не имеющего химических групп для взаимодействия с IgG. На основе полученных соединений синтезированы модельные иммуноконъюгаты с высокой степенью включения Rod, сохраняющие свою антигенсвязывающую активность. Таким образом, показана возможность использования для создания иммуноконъюгатов фармакологических веществ, имеющей в своей структуре карбоксильные группы, не пригодные для осуществления подобного синтеза, показана перспективность модификации фармакологических веществ по карбоксильной группе пиперазином и SMCC для получения иммуноконъюгатов.