Российский онкологический журнал

Обоснование. По данным статистики, рак желудка занимает лидирующую позицию среди всех онкопатологий желудочно-кишечного тракта. Самое эффективное лечение рака желудка — хирургическое вмешательство. Сейчас наблюдается гетерогенность клинических исходов для пациентов с одной и той же стадией болезни. Основные причины — это различия в подтипах рака желудка не только на гистологическом, но и на молекулярном уровне. Поиск универсальных биомаркёров, которые смогут дать информацию о прогнозе для пациентов, является предметом интереса учёных по всему миру. MMP-7 — наименьшая молекула из семейства матриксных металлопротеиназ, которая вносит существенный вклад в онкогенез путём воздействия на апоптоз и деградацию внеклеточного матрикса. Гиперэкспрессия MMP-7 связана с агрессивным фенотипом опухоли и ухудшает прогноз у пациентов с раком желудка. Именно поэтому MMP-7 может быть перспективным биомаркёром в лечении рака желудка.

Цель — выявить возможную корреляцию между наличием экспрессии MMP-7 у больных раком желудка и их прогнозом.

Материалы и методы. В исследование были включены образцы 80 пациентов с диагнозом «диффузный рак желудка», которые подверглись отбору на основе разработанных нами критериев включения и исключения. В качестве группы сравнения были взяты 30 секционных образцов желудков. Из 80 пациентов, включённых в исследование, гастрэктомия была выполнена у 55% (44 человека), а резекция желудка — у 45% (36 человек).

Результаты. В нашей работе высоким уровнем экспрессии MMP-7 считался 0,8±0,07, а низким — 0,40±0,067. В ходе исследования мы оценивали взаимосвязь уровня экспрессии MMP-7 с клиническими характеристиками опухоли. Мы оценивали следующие показатели: стадия заболевания, наличие поражения лимфатических узлов и размер опухоли. Пациенты с повышенной экспрессией MMP-7 в опухолевой ткани по сравнению с неопухолевой тканью имеют тенденцию к лучшему прогнозу, чем пациенты с низкой экспрессией MMP-7 в клетках опухоли.

Заключение. Результаты нашего исследования показали высокую экспрессию MMP-7 в опухолевых тканях при раке желудка, что позволило нам установить корреляцию между экспрессией MMP-7 и неблагоприятным клиническим исходом. Полученные данные могут свидетельствовать о возможном использовании MMP-7 в качестве биомаркёра при раке желудка.

Обоснование. Несмотря на большое количество публикаций о доклинических исследованиях соединений с предполагаемым противоопухолевым действием на моделях in silico и in vitro, наиболее информативными являются исследования in vivo. Экспериментальная часть работы на лабораторных животных имеет свои особенности в области доклинических исследований: большое количество животных и соединений-аналогов в серии, двух- и трёхфазная этапность проведения и, следовательно, высокая стоимость и трудозатратность исполнения.

Цель — оптимизация алгоритмов скринингового доклинического исследования in vivo элементоорганических соединений с предполагаемым противоопухолевым действием.

Методы. Для формирования алгоритма в доклиническом исследовании использовались первичные данные, полученные с применением стандартных фармакологических (определение класса токсичности, противоопухолевой и антиметастатической активности, процента торможения роста опухоли по массе, средней продолжительности жизни животных) и морфологических (аутопсия, приготовление микропрепаратов с окрашиванием гематоксилином и эозином, иммуногистохимическое исследование с помощью моноклональных антител) методов с последующим отбором соединений-лидеров для углублённого изучения с описанием механизма реализации фармакологической активности.

Результаты. На основании серии сравнительных экспериментов был апробирован следующий алгоритм доклинического исследования in vivo для вновь синтезированных элементоорганических соединений с предполагаемым противоопухолевым действием:

1 этап. Определение класса токсичности соединения при однократном внутрижелудочном введении крысам линии Wistar по протоколу Organization for Economic Co-operation and Development 420 и отбор кандидатов в противоопухолевые лекарственные средства по принципу наибольшей безопасности применения.

2 этап. Определение наличия/отсутствия фармакологической активности тестируемых соединений. Соединения IV и V классов токсичности (по Согласованной на глобальном уровне системе классификации опасности и маркировки химической продукции) в широком диапазоне доз (дозы подбираются в зависимости от класса токсичности) исследуются на предмет фармакологической активности до естественной гибели животных-опухоленосителей с выявлением лидерных субстанций, углублённое изучение которых является целесообразным. Отбор перспективных субстанций и суммарных доз для введения на следующем этапе определяется продолжительностью жизни животных-опухоленосителей.

3 этап. Определение показателей противоопухолевой и антиметастатической активности лидерных субстанций с установленным сроком эвтаназии для всех животных-опухоленосителей и определением возможных механизмов реализации терапевтического эффекта с помощью иммуногистохимического анализа.

4 этап. Изучение влияние тестируемых соединений на темпы роста первичного опухолевого узла и метастатических очагов на разных стадиях развития опухолевого процесса, при введении в разных режимах, в составе комбинированной и монохимиотерапии с обязательным уточнением механизмов реализации противоопухолевой и антиметастатической активности с помощью биохимических и иммуногистохимических методик.

5 этап. Исследование наиболее перспективных соединений согласно Руководству по доклиническим исследованиям безопасности в целях проведения клинических исследований и регистрации лекарственных препаратов (документ утверждён решением Коллегии Евразийской экономической комиссии от 26 ноября 2019 г., N 202): «Исследования токсичности при повторном (многократном) введении лекарственного препарата, доклинические исследования, проводимые в целях обоснования проведения поисковых клинических исследований, исследования местной переносимости лекарственного препарата, исследования генотоксичности лекарственного препарата, канцерогенности лекарственного препарата и др.»

Заключение. Описанное нами поэтапное исключение тестируемых соединений из линейки близких по строению элементоорганических субстанций позволит увеличить эффективность отбора перспективных кандидатов в противоопухолевые лекарственные средства и снизить затраты на проведение доклинических исследований соединений с предполагаемым противоопухолевым действием.

Обоснование. Во время созревания дендритные клетки начинают синтезировать пептиды, которые включают молекулы главного комплекса гистосовместимости MHC-II, костимулирующие молекулы CD40⁺, CD80⁺ и CD86⁺, а также CD83⁺. У онкологических больных дисфункция дендритных клеток может привести к серьёзным последствиям в виде дефицита противоопухолевого иммунитета, прогрессии опухоли и снижения ответа на иммунотерапию. Всё это важно учитывать для переосмысления стратегии иммунотерапии опухоли. Таким образом, подходы, направленные на усиление жизнеспособности дендритных клеток, профилактику их дисфункции и поляризации, следует рассматривать как необходимый этап работы по увеличению эффективности дендритно-клеточных вакцин.

Цель — оценка особенностей экспрессии дифференцировочных маркёров созревания дендритных клеток, полученных из моноцитов периферической крови в условиях культивирования у пациентов с раком молочной железы.

Материалы и методы. С информированного добровольного согласия были обследованы 19 пациентов с диагнозом «рак молочной железы». Мононуклеарные клетки выделяли на градиенте плотности Ficoll. Для адгезии моноцитов на дно культуральных флаконов площадью 75 см² их предварительно инкубировали в течение 1,5 ч в условиях 5% СО₂ при 37 ℃. К прикрепившимся моноцитам добавляли ростовые факторы и факторы дифференцировки — GM-CSF (40 мкл) и IL-4 (40 мкл), которые вносили на 1-й, 3-й и 5-й дни культивирования. Иммунофенотипирование дендритных клеток проводили на 7-й и 9-й дни культивирования методом проточной цитофлуориметрии.

Результаты. Данные проточной цитофлуориметрии указывают, что жизнеспособность культивируемых дендритных клеток у онкобольных существенно снижается на 9-й день по сравнению с 7-м днём культивирования. На 9-й день отмечается значимое повышение экспрессии CD80⁺ (в 2,40, p=0,028)) и снижение СD83⁺ (в 1,65, p=0,036) по сравнению с 7-м днём.

Заключение. В целом отмечаются значимые признаки созревания дендритных клеток: потеря маркёра моноцитов CD14⁺, повышенная экспрессия CD80⁺, СD83⁺, СD86⁺ — основных маркёров. Снижение СD83⁺ можно рассматривать как подавление чрезмерной активации иммунных реакций. В дальнейшем необходимо более углублённое изучение особенностей созревания и активации культивированных дендритных клеток для понимания механизмов и факторов, влияющих на снижение эффективности иммунотерапии аутологичной дендритно-клеточной вакциной.